哺乳動物基因普通表達腺相關病毒載體視會

概述

腺相關病毒（AAV）載體系統是一種(zhǒn美微g)備受歡迎的體内外基因傳遞系統，對(du看如ì)哺乳動物多種(zhǒng)類型細胞具有高效的轉導效率。不同于腺病毒我劇，AAV的免疫原性極低，在體内幾乎沒(méi)有緻病性謝刀，使得AAV成(chéng)爲許多動物研究的理件農想工具。

AAV重組載體構建完成(chéng)後(hòu)與輔助質粒一起(qǐ)轉染請服進(jìn)入包裝細胞。在包裝細胞中，位于兩(liǎng)個反向(大和xiàng)重複序列（ITRs房嗎）之間的DNA片段與輔助質粒表達的病毒蛋白進(jìn)一步包裝成(c媽知héng)病毒顆粒。

當病毒轉導宿主細胞時(shí)，兩(liǎng)個ITR之間的外源DNA及病熱女毒基因組一起(qǐ)進(jìn)入細胞，線村市性雙鏈DNA基因組以遊離DNA通費的形式存在于細胞核中。

在大多數情況下，可以在生物安全1級（B輛讀SL1）設施中處理AAV。AAV是複制缺陷型的、不會(huì)引起(qǐ)炎他遠症反應和引發(fā)人類疾病。

人們已從自然界中鑒定出許多AAV病毒株，根據病毒表面(miàn)衣殼蛋白的路花不同抗原將(jiāng)它們分成(chéng)不同的血清型。不同員姐血清型的病毒具有不同的組織嗜性（即感染組織特異性）。當我草麗們的AAV載體使用不同的衣殼蛋白包裝病毒時(shí)，則門頻會(huì)賦予病毒不同的血清型。AAV包裝時(shí)的ITR房店序列來源于AAV2，這(zhè)是一種(zhǒng)常用的AAV載體筆黃構建方式，不影響血清型。另一方面(黑街miàn)，決定血清型的衣殼蛋白基因由Rep/Ca他錢p包裝質粒編碼。下表列出了不同的AAV血清型及對(duì)應的組織嗜性。

以血清型分類以組織嗜性分類

血清型	組織嗜性
AAV1	Smooth muscle, CNS, brain, lung, retina, inner ear, pancreas, heart, liver
AAV2	Smooth muscle, CNS, brain, liver, pancreas, kidney, retina, inner ear, testes
AAV3	Smooth muscle, liver, lung
AAV4	CNS, retina, lung, kidney, heart
AAV5	Smooth muscle, CNS, brain, lung, retina, heart
AAV6	Smooth muscle, heart, lung, pancreas, adipose, liver
AAV6.2	Lung, liver, inner ear
AAV7	Smooth muscle, retina, CNS, brain, liver
AAV8	Smooth muscle, CNS, brain, retina, inner ear, liver, pancreas, heart, kidney, adipose
AAV9	Smooth muscle, lung, liver, heart, pancreas, CNS, retina, inner ear, testes, kidney, adipose
AAV-rh10	Smooth muscle, lung, liver, heart, pancreas, CNS, retina, kidney
AAV-DJ	Liver, heart, kidney, spleen
AAV-DJ/8	Liver, brain, spleen, kidney
AAV-PHP.eB	CNS
AAV-PHP.S	PNS
AAV2-retro	Spinal nerves
AAV2-QuadYF	Endothelial cell, retina
AAV2.7m8	Retina, inner ear

組織嗜性	推薦AAV血清型
Smooth muscle	AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10
CNS	AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-PHP.eB
PNS	AAV-PHP.S
Brain	AAV1, AAV2, AAV5, AAV7, AAV8, AAV-DJ/8
Retina	AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV2-QuadYF, AAV2.7m8
Inner ear	AAV1, AAV2, AAV6.2, AAV8, AAV9, AAV2.7m8
Lung	AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV6.2, AAV9, AAV-rh10
Liver	AAV1, AAV2, AAV3, AAV6, AAV6.2, AAV7, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
Pancreas	AAV1, AAV2, AAV6, AAV8, AAV9, AAV-rh10
Heart	AAV1,AAV4, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ
Kidney	AAV2, AAV4, AAV8, AAV9, AAV-rh10, AAV-DJ, AAV-DJ/8
Adipose	AAV6, AAV8, AAV9
Testes	AAV2, AAV9
Spleen	AAV-DJ, AAV-DJ/8
Spinal nerves	AAV2-retro
Endothelial cel秒高ls	AAV2-QuadYF

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。

參考文獻	主題
Methods in Enzy. 507:229-呢刀54 (2012)	Review of AAV virology and服土 uses
Curr Opin Pharmacol. 24:59-6如商7 (2015)	AAV use in gene therapy, and ser會拿otype differences

亮點

我們的AAV載體是經(jīng)過(guò)優化的微習，可在大腸杆菌中進(jìn)行高拷貝複制，是一個包裝病毒滴度資月高，細胞轉導效率高，轉基因高水平表達的載體系統。該載體可用所有已知衣殼蛋白血清姐水型的輔助質粒進(jìn)行包裝，包裝出來的病毒具有非動媽常高的轉導效率，且具有極高的生物安全性。

優勢

安全性：AAV是可供選擇的最安全的病毒載體，它是複制缺陷的，我年不會(huì)引起(qǐ)任何人類疾病。

對(duì)宿主基因組造成(chéng)破壞的低風險自資性：在轉導進(jìn)入靶細胞後(hòu)，AAV病毒載體在細胞她舊核保持著(zhe)遊離DNA的狀态，可以降低宿主基因組被(bèi)破壞而緻中多癌的風險，使其成(chéng)爲人類體内實驗的理想載體。

高病毒滴度：利用我們的AAV病毒載體可以包有男裝成(chéng)高滴度的病毒。我們提供的病毒包裝服務病毒滴度可達到你著>10¹³ GC/ml。

宿主範圍廣：針對(duì)不同來源的常用哺乳動物（如人、小鼠和大鼠）細胞和組織，一書將(jiāng)我們的AAV載體包裝成(chéng商花)對(duì)其具有親和性的血清型，可輕易實現高效轉導。但是，某些類型的細胞東都仍然難以轉導（見下文不足之處），這(zhè)與所用的務門血清型有關。

體内外實驗均有效：我們的載體不僅能(néng)用于體内活體動物實驗，章快還(hái)具有體外細胞轉導能(néng)力商信。

不足之處

載體容量小：AAV是我們所有病毒載體系統中裝載多器量最小的。AAV的兩(liǎng)個ITR之間家照所能(néng)容納的最大序列長(cháng)度爸遠是4.7 kb，允許使用者插入~4.2 kb的目的序列。

難以轉導特定類型的細胞：當利用合适的血清型進(jìn)行包裝時(得動shí)，我們的AAV載體系統可以轉導答村很多不同類型的細胞，包括非分裂細胞。不同AAV血清型對(duì)不同類型的細行吧胞具有不同的嗜性，針對(duì)某種(zhǒng)特定類友拿型的細胞需要特定血清型。

技術複雜：使用AAV病毒載體時(shí)，需要在包裝細胞中森朋産生活病毒，然後(hòu)測定病毒滴度。這(zhè)些過(guò)程相對(du白下ì)于常規質粒轉染，技術難度更草分高，周期更長(cháng)。在訂購載體的老草同時(shí)，可以通過(guò)訂購我們的病毒通服包裝服務輕松解決這(zhè)些問題。

載體關鍵元件

5' ITR: 5' inverted terminal repeat. In wild t家鄉ype virus, 5' ITR and 3' IT現熱R are essentially identi內下cal in sequence. They reside on t短歌wo ends of the 樹媽viral genome pointing 司匠in opposite directions, where they ser資友ve as the origin of vira慢外l genome replicat看來ion.

Promoter: The promoter that drives your g什妹ene of interest 不輛is placed here.

Kozak: Kozak consensus sequence. It is plac謝中ed in front of the start codo明愛n of the ORF of inter銀子est to facilitate tr文去anslation initia不一tion in eukaryotes.

ORF: The open readin離業g frame of your gene of interest is pl器老aced here.

Regulatory element: 從綠Allows the user to add t算化he Woodchuck he工睡patitis virus posttranscri你呢ptional regulatory element (WPRE). WP女來RE enhances virus s跳厭tability in pack山是aging cells, leading to high呢化er titer of packaged作舊 virus; enhances higher expression of 白在transgenes.

BGH pA: Bovine growth hormone p下一olyadenylation. It facilitate拍東s transcriptional termination of th她些e upstream ORF.

3' ITR: 3' inverted terminal repeat. S拿街ee description for 5’ ITR.

Ampicillin: Ampicillin resistance gen鄉都e. It allows the plasmid to be mai什小ntained by ampicillin sele刀朋ction in E. coli.

pUC ori: pUC origin of replicat在用ion. Plasmids carrying this origin我路 exist in high c道機opy numbers in E. coli自村.

Representative vector d還相esign

VB ID	Vector name	Descriptions
VB010000-9394npt	pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPR姐南E	A single-stranded AA銀制V (ssAAV) mammalian gene還務 expression vector可化 encoding CMV-driven EGFP w西在ith a WPRE regulatory element.
VB231214-1622uat	pAAV[Exp]-CAG>朋關;hSMN1[NM_000344.4]:WPRE	A single-stranded AAV (ssAAV) v區跳ector expressing a human 頻科survival motor neuron gene SMN1, which 藍農is associated with SMA, drive看理n by a CAG promoter with the regulato請劇ry element WPRE子請.

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