雲舟生物提供可應用于體外和體内實驗的現貨IVT mRN開理A和LNP-mRNA。我們的mRNA和LNP經(jīng)過(guò)驗議子證，可作爲您的mRNA實驗對(duì)照組或者用于估算吃校你的LNP-mRNA遞送體系的效民長率。更多IVT mRNA的和LNP-mRNA制備服長動務，請參照mRNA基因遞送解決方案。對(duì)于規模化生産mRNA藥物，請綠林參照我們的CDMO服務頁面(miàn)。
亮點
運輸與保存
我們的mRNA産品存儲于1 mM檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.4）鐵是，并以幹冰形式發(fā)貨。mRNA可在-80℃下保存1我亮2個月。請避免反複凍融mRNA。
IVT mRNA制備與質量控制
圖1 體外轉錄合成(chéng)mRNA的典型流程
我們的IVT mRNA制備首先從設但新計和合成(chéng)模版DNA序列開(kāi)始，并考慮一系列因校飛素如密碼子選擇、GC含量、熱力學(xué)穩定性、RNA二級結構 動服等，然後(hòu)將(jiāng)其克隆到體外轉錄載體草身中。然後(hòu)對(duì)質粒DN裡兒A進(jìn)行純化、驗證和線性化，然後(hòu)進會這(jìn)行體外轉錄反應，從而産生所需 的轉錄本。我們通過廠現(guò)引入修飾的核苷酸，有助于改善mRNA的商林體内的翻譯效率并減低免疫反應。我們采用共轉錄或者酶促 法進會海(jìn)行mRNA加帽，效率可達95%以上。經(jīn區都g)過(guò)磁珠純化後(hòu)的mRNA還(hái)會(她樂huì)通過(guò)一系列QC驗證以保證終産品的科文質量。
典型的IVT mRNA質檢結果
圖2 典型的IVT mRNA質檢結果
（A）IVT mRNA的完整性通過(guò)變店人性凝膠電泳鑒定。實驗結果可見符合分火答子量大小的銳利條帶。（B）經(jīng兵區)過(guò)生物素化的5’ RN到金ase H處理和親和富集，IVT mRNA的加帽效率采用液相質譜（LC-M民金S）分析。帽子相關的切割産物可以用不同的質量數值進(jìn)行分辨秒開。逆卷積質譜的質量峰值的下方區域被(b木照èi)計算爲cap 1結構的比例。
典型的LNP-mRNA質檢結果
雲舟生物針對(duì)LNP-mRNA的質檢測試包括多種(zhǒng)方法檢讀街驗純度、遞送效果、以及穩定性。對(duì)于現貨LNP-mRNA，默工廠認的質檢測試包括粒徑、PDI、zeta電勢和封裝效率（EE笑物%）。
雲舟生物的LNP經(jīng)過(guò)就視優化，可以獲得非常低的PDI值（PDI<0.1）。此外，對(duì)于體店雲舟生物生産的所有LNP-mRNA，我們保證LNP的zeta電美歌勢在-10 mV到+10 mV。
圖3 典型的LNP-mRNA質檢結果
（A）粒徑通過(guò)動态光如在散射（DLS）測定。該方法可以測量粒子運動帶來的散射光強度的波動變弟和化。多分散指數（PDI）反映的則是樣(yàng)本中的粒子尺寸鐵事的異質性。（B）Zeta電勢反映了LNP的醫頻穩定性。樣(yàng)本中的Zeta電勢範圍在-1.問制872到+1.872 mV之間。&上自nbsp;
使用說(shuō)明書
Cap 0是指將(jiāng)N7甲基鳥苷（m7G）以5'至5'三磷酸連接的方土在式添加到真核mRNA的5’端。這(愛飛zhè)種(zhǒng)修飾是通過(guò化資)一系列共轉錄酶促反應添加的，其功多美能(néng)是調節細胞核輸出、轉錄穩定性，并通過(guò)真核翻譯起(qǐ都做)始因子（eIF4E）的識别促進(jìn)mRNA的翻錯那譯。Cap 1是指除了m7G C房慢ap之外，進(jìn)一步在轉錄mR公微NA序列的第一個核苷酸（m7GpppNm）的2' O跳離上添加甲基。在哺乳動物細胞中，Cap 1結構是mRNA被(bèi)識小女别爲自身而非先天免疫靶向(xià門刀ng)的重要标志。在合成(chéng)的mRNA中添加Cap 1結構少爸可以增強體内mRNA的表達并降低是年其免疫原性。
體外轉錄mRNA的5'帽子可以以加入Cap類似物共轉錄的方式添加，也日市可以通過(guò)酶促反應在轉錄後(hòu)添加。我們提供了兩(liǎng)子師種(zhǒng)加帽方式，其效率已通過(guò)LC-MS驗證表來開現良好(hǎo)。根據客戶首選的加帽方法，我們將少她(jiāng)從一開(kāi)始就(j城爸iù)選擇。
細胞包含位于胞質的和内涵體的兩(liǎng)類RNA受體，它們話舞在識别外源RNA時(shí)將(jiāng)激活免疫民理反應。修飾核苷酸通常存在于細胞他劇的内源性RNA中。在IVT mRNA中你自加入某些修飾的核苷酸可降低其免疫原性，改變二級結構，麗中并以序列依賴的方式提高翻譯效率和延長(cháng)半衰期。我制議們提供了多種(zhǒng)類型的修飾核苷酸，包括常用的N1-甲基假尿都我苷（m1Ψ）和5-甲基胞苷（m5離北C）。N1-甲基假尿苷和5-甲基胞苷房站是最早發(fā)現的天然來源是 tRNA，然而，它們在mRNA中的功是不能(néng)直到最近才得到重視。尿苷和胞苷的這(zhè)些甲基化衍林男生物可以在mRNA IVT和翻譯中取代它們黃還使用的默認核苷，而不改變傳統的Wats他到on-Crick堿基配對(duì)。在mRNA治療中使用它們的一個主從化要優勢是它們能(néng)夠幫助RNA規避免疫受體的識别，從而減輕慢一不必要的免疫反應，增強轉錄穩定性和翻譯效率。
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