細菌蛋白表達載體pBAD

pBAD載體系統是用于在細菌中表達重組蛋朋外白的可靠且可控的系統，該系統通過(g計林uò)araBAD操縱子控制大腸杆菌L-阿拉伯糖的代謝。將(jiāng)目的基白生因置于pBAD載體中araBAD啓動子的下遊遠店，當L-阿拉伯糖存在時(shí)，araBAD啓動子驅動目的基因的高效表達；習風當葡萄糖存在時(shí)，目的基因的表達則被(bèi)抑制。該載體系統可精樂男确控制目的基因的表達，特别适用于生産困難蛋白，如具有毒性或不很員溶性蛋白。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。

首先，將(jiāng)目的基因克隆到p紅這BAD載體上，并將(jiāng)攜帶該質老動粒的菌株在缺乏L-阿拉伯糖的生長(cháng)培養基中培養以降低質粒作快不穩定性。然後(hòu)，通過(guò)向(xiàng)培養基中加又森入L-阿拉伯糖來誘導目的基因的表達。

我們的pBAD載體上攜帶的雙向(xiàng)araBAD啓動子可同時嗎房(shí)驅動目的基因和調節蛋白AraC的表低腦達。在缺少L-阿拉伯糖的情況下，AraC在啓動子區域二聚化形成(chéng)工作環阻斷轉錄。當添加L-阿拉伯糖時(shí)，A舊黑raC改變構象并結合到啓動子中的替代位點，從而激活她也轉錄。

向(xiàng)生長(cháng)培養基中添加葡萄糖，宿主細胞cAMP水地通平降低，可以進(jìn)一步抑制目的基因的本底表達。在無還喝葡萄糖的培養基中，cAMP水平很高，cAMP-CRP（好金代謝物激活蛋白）複合物會(huì)與pBAD啓動子結合，從而抑制目的基因的表達靜多，這(zhè)將(jiāng)有利于表達具有細胞毒性或抑制細菌生男厭長(cháng)的目的基因的表達。

所有定制的pBAD載體都(dōu)會又了(huì)克隆在能(néng)夠保持質粒穩定的大腸杆菌中（如Stbl3）工放，可將(jiāng)質粒轉移至缺乏L-阿拉伯糖分解代謝基因的妹空宿主菌株（如TOP10）中，使目的基因有效且穩些商定的表達，因爲L-阿拉伯糖的濃度不會(huì)随著拿煙(zhe)時(shí)間的推移降低。對(duì)于需要利金科用葡萄糖嚴格抑制本底表達的，則應該使用LMG194宿主菌株。該菌株動放能(néng)夠在基礎培養基（RM培養基）上生長(cháng)，可通過(短知guò)葡萄糖進(jìn)一步在靜抑制araBAD啓動子。

表達高度嚴謹：pBAD載體系統比pET載體系統們新的表達更嚴謹。在缺少L-阿拉伯糖的情況下，目的基因可能(néng)隻有非常低樂數的本底表達，但可通過(guò)葡萄糖進(jìn)一步抑制。

誘導強度高：araBAD操縱子系統是高度可誘導的。在去除葡萄糖并添加L-知微阿拉伯糖後(hòu)，可實現>1000倍的誘導效率。

誘導成(chéng)本低：L-阿拉伯糖價格低廉，大規模蛋白表達經(jīng)林有濟實惠。

宿主要求：與pET載體不同，pBAD載體可以穩定存在于表達菌株中，如TOP10。雨新

表達水平次于pET載體：基于pBAD載體系統的重組蛋白水平低于pET得通載體系統。

誘導物代謝：野生型大腸杆菌可分解L-阿拉伯糖。當表達目的蛋白時(shí)，應該使用黃信L-阿拉伯糖分解代謝突變的宿主菌株（如TOP10或LMG194），計拿以避免由于培養基中L-阿拉伯糖的降解而引起間線(qǐ)表達不穩定。