作爲全球最大的定制載體服務商，雲舟生物可以根據您的實驗需求量身定制您的DNA店筆載體。我們擁有超過(guò)200種(z兵我hǒng)經(jīng)過(guò)優化且适用于各種(zhǒn綠是g)研究應用的載體系統，均經(jīng)過(guò)體外試驗以及部外要分體内試驗驗證。使用我們的平台進(低紅jìn)行載體定制和克隆將(jiāng)顯著降低傳統實驗室又身DIY載體的時(shí)間成(店朋chéng)本并提高載體構建的效率。
除了DNA載體的分子克隆外，我們還(h子多ái)提供多種(zhǒng)相關服務如質粒DNA制備、病毒包自綠裝（慢病毒、AAV、腺病毒、MMLV、杆狀病毒等）、文庫構建、子廠BAC突變、點突變、穩轉細胞株構建以及RNA制備等。
亮點
您可以通過(guò)以下方式獲取載體克隆服務：
雲舟生物將(jiāng)以超低價和快周期爲們多您提供高效、專業的載體構建服務。我們的克隆服務價格比您自己制備媽用克隆所需的試劑成(chéng)本更低，可以爲您節省時(sh錢舊í)間和精力。所有定制的載體都(dōu)經(jīng)過(guò)嚴格的質說站量控制，以确保交付的載體符合您的設計要求。最終交付形式是包含目的載體的大腸杆著裡菌。價格和周期請參考以下表格。
常規載體構建服務
由雲舟生物提供的标準化骨架和标準化元件進(jìn)行載體構建議用。
常規載體的價格和周期如下：
| 服務類型 | 價格 (CNY) | 周期* |
| shRNA載體構建 | ￥1,080起(qǐ) | 4-7 天 |
| gRNA載體（單gRNA）構建 | ￥1,080起(qǐ) | 4-7 天 |
| gRNA載體（雙gRNA）構建 | ￥2,380起(qǐ) | 6-12 天 |
| 表達載體構建 | ￥1,180起(qǐ) | 3-6 天 |
* 周期的定義：從接受訂單到發(fā)貨的時(shí)間物是，不包括客戶準備材料所需要的時(shí)間（例如提供模闆DNA信熱）。腺病毒載體可能(néng)需要更長(cháng)時(shí)間。遠子
複雜載體構建服務
複雜載體是指使用VectorBuilder标準化骨架，但由更爲複雜的需南物要構建的元件組裝而成(chéng)的載體。它們通常要經(jī間子ng)過(guò)多個步驟來構建，并且涉及複雜坐數的操作過(guò)程，例如大片段答他的擴增、多個片段融合、基因合成(去外chéng)和靶向(xiàng)突變等。
複雜載體的額外價格和周期：
| 克隆步驟 | 額外價格 (CNY) | 額外周期 |
| 插入一個PCR片段* | ￥1,180起(qǐ) | 9-18 天 |
| 插入多個融合PCR片段* | ￥1,480起(qǐ) | 10-26 天 |
| 基因需要從頭合成(chéng)** | 基因合成(chéng)費 + 加工費 | 14-28天 |
| 靶向(xiàng)突變 | ￥1,100/位點 | 7-9 天 |
對(duì)于克隆上面(miàn)未列出的其他黃地類型片段，例如高GC片段，簡單重複或分段重複序列，可能(néng)需要生草額外的費用和周期。
*對(duì)于7kb<ORF<10kb的，需要額志懂外增加￥1,000 費用和 10 天拍會的周期。對(duì)于ORF需要添加pro訊船moter、tag或者在其兩(liǎng)端添加酶視是切位點的，額外費用請咨詢。
**對(duì)于<10kb的ORF，合成(水計chéng)費用將(jiāng)根據合成去河(chéng)的長(cháng)度定價在￥1/bp-￥1.5跳務/bp之間。對(duì)于>10kb的ORF，基因從頭合成(chén見房g)的價格與周期請咨詢。
我們默認的質粒載體交付方式是E. coli甘油菌。對(duì)于不同的需求，我什慢們可以提供不同規格的質粒DNA提取服務：小提（>女友;10 ug），中提（>100 ug），大提坐姐（>300 ug），超大提（>拍科;1 mg），以及特大提（>10 mg）。對(duì)于病毒載紅下體，病毒包裝以不同規格的下遊服務方式提供。
我們的載體經(jīng)過(guò)嚴格的質量控制步驟以保證序列與設計方案一緻訊話。常用的質量控制方式有DNA純化、A260/28做自0測定、酶切鑒定、Sanger測序、從甘油菌中提取質粒并重新轉森舊化等。
如果客戶選擇自行提供載體構建的相關材料，我們將(j業謝iāng)對(duì)其提供的載體骨架進(j章可ìn)行限制性内切酶酶切鑒定，并對(duì個山)關鍵區域進(jìn)行測序驗證。該類載體屬于非标準載體，載體價格因情況而定到舞。
如果需要提供骨架或模闆，請按照“外來物品接收指南1.0”將(jiāng)相應材料郵寄給我們。
甘油菌使用說(shuō)明
載體家構建的質粒載體一般以甘油菌形式交付。關于甘低著油菌的使用可參考以下視頻内容：
使用說(shuō)明書
雲舟生物可使用多種(zhǒng)策略進不水(jìn)行載體克隆。在我們的高度優化的克隆平台上，一般得來的表達載體我們使用Gateway克隆和Gibson組裝等方式構建熱資，而shRNA和gRNA載體則玩木使用基于直接連接的方式構建，價格低且周期短。此外，根據具體項目森從的需要，我們也可以使用從頭基因合成(chén請門g)、Golden Gate等方式構建載體。
雲舟生物構建的質粒載體的宿主菌通常爲VB Ultr舊問aStable™，一種(zhǒng)轉化效率高（>1x109 cfu/ug）并可用于擴增不穩定重複序列的菌株。因此，我們也船高高度推薦您使用我們的VB UltraStable™化學(x和民ué)感受态細胞以用于您的載體擴增實驗。我們也提供其它宿主菌，如D近風H5α和Stbl3，可滿足多樣(yàng)的實驗需要。
質粒上的複制起(qǐ)點屬于低拷貝型
質粒的拷貝數是由質粒上的複制起(qǐ)點決定裡我的，有的複制起(qǐ)始點屬于低拷貝型。請确認質粒上複制南厭起(qǐ)點類型。對(duì)于低拷貝質粒業作，則需要擴大細菌培養量以獲得足夠的質粒DNA。
用于質粒提取的菌量過(guò)少
請檢查确認質粒制備柱的結合容量以及您的業我質粒是高拷貝還(hái)是低拷貝質粒。對(du場場ì)于小量提取，我們建議您收集1-5 ml過(g員能uò)夜培養菌液。對(duì)于大量提取，如果質粒是高拷貝，我們推薦使用1答得00-150 ml過(guò)夜培養菌街看液；如果是低拷貝，我們推薦使用300-500 ml過(g朋不uò)夜培養菌液。一般情況下，對(錯文duì)于高拷貝質粒，1 ml的過(guò)夜培養菌液可以小量提取約5 u低厭g的質粒DNA，150 ml的過(南睡guò)夜培養菌液可以提取約500 ug的質粒DNA；對(d愛看uì)于低拷貝質粒（如pET），1 ml過(guò)夜培養土理菌液可以小量提取1.5-2.5 ug質粒DNA，150 m呢匠l過(guò)夜培養菌液可以提取150-200 ug質粒DNA。
隻有小部分菌體含有質粒
有的抗生素，尤其是氨苄青黴素，在液體培去村養中會(huì)快速降解，導緻不含質粒的細菌可以大量繁公劇殖，最終使得質粒制備産量低。爲了避免這(zhè)種(zhǒ微章ng)情況，請在使用前新鮮制備含氨苄青黴素的生長(ch商森áng)培養基，并确保提供足夠的濃度。另外，在培養具有氨苄抗性的細知身菌時(shí)，請不要讓菌液飽的問和培養時(shí)間過(guò)長(chá雨我ng)。因爲随著(zhe)培養時(shí)間的增加，開還培養基的抗生素會(huì)越來越少動數，許多細菌細胞也已死亡且它們所含的質粒DNA會(huì)被(司來bèi)降解，所以從過(guò)飽和培草高養的菌液中提取的質粒DNA産量會(huì)低。服見請從新鮮菌液提取質粒DNA，如果不能(néng)立即進(jìn)行質粒制備，則公一可以將(jiāng)菌體離心沉澱，并儲存于離對-80°C冰箱中備用。
直接取甘油菌進(jìn)行接菌培養
直接將(jiāng)接收到的甘油菌或穿刺藍得菌進(jìn)行接種(zhǒng)，可能(néng)會(刀嗎huì)偶爾出現質粒制備産量低的情況。我們建議先在含有适當抗生素西山的LB平闆上劃線，然後(hòu)挑取單菌落接種(zhǒng)到東黃含有相應抗生素的新鮮液體培養基中。具體操作說(shuō)明請在菜單欄訊上“資源中心>說(shuō)明書/MSDS>甘油菌”進(jìn)行體車查看。
沒(méi)有正确使用質粒提取試劑盒
請在使用前仔細閱讀質粒制備試劑盒使用說(sh錢快uō)明書，防止不當操作。
質粒制備柱質量較差
某些品牌的質粒DNA制備柱質量較差，請及時(shí)檢測更換相應中又試劑盒。
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