mRNA體外轉錄載體

概述

我們的體外轉錄載體是簡單有效的RNA轉錄系湖笑統，适用于各種(zhǒng)研究。通過(guò)mRNA體外轉錄載體獲得的行腦mRNA适用于體外翻譯、生物化學(xué)研究、注射入細胞或胚胎作跳後(hòu)的蛋白表達、以及特定序費姐列的其他mRNA應用。

該系統利用目的序列上遊的T7啓動子，通過雪但(guò)T7噬菌體RNA聚合酶（T7 RNAP）和三磷酸核如村苷酸，在适當的反應條件下高效生成(chéng)mRNA。我們建議您參考已謝民發(fā)表文獻中經(jīng)測試的體外轉錄步驟說(河光shuō)明來進(jìn)行體外轉錄。

T7 RNAP對(duì)于有效公店的轉錄起(qǐ)始具有堿基要求，且這(zhè)些堿基已經(jīng)被也和(bèi)放置到載體上。T7啓動子3'末端的前兩(liǎng)鐵弟個堿基是GG，緊接著(zhe)是客戶的目的序列。

我們的mRNA體外轉錄載體會(huì)發(fā)生失控轉錄，這(zhè火中)意味著(zhe)T7 RNAP的轉錄草們能(néng)進(jìn)行到DNA模闆的新近末端，不會(huì)在質粒内的任何特定位點終止。因此，村藍在體外轉錄之前，應通過(guò)使用服唱SapI，BsiWI或AscI等限制性内切酶來單酶切線性化環狀質粒，以确保師如轉錄物的長(cháng)度和序列，這(zhè)光舞些單酶切位點緊鄰poly（A）序列的下遊。值得注意的也書是，待轉錄的序列不能(néng)含有所用線性化酶切船也位點，以免産生截短的mRNA。不純的酶切産物可能(n兵站éng)會(huì)抑制随後(hòu)的轉錄反應，因此建議通過(guò)柱子或懂是酚氯仿來純化酶切産物。

在體内應用中，mRNA 車師5'末端添加7-甲基鳥苷帽對(duì)于RNA的穩定、有效翻譯、地件核轉運和剪接是非常必要的。對(duì)于大討員多數研究應用而言，加帽的RNA也是必須的。錯能RNA加帽可以通過(guò)使用帽子類似物共轉錄或使用加帽酶照電轉錄後(hòu)修飾。兩(liǎng)種生外(zhǒng)方法都(dōu)能(néng)産生适用于注射、體外翻譯和其他應有姐用的功能(néng)性加帽RNA。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。

參考文獻	主題
Nucleic Acids R生歌es. 7:1931 (1979)	Cloning and characterization 妹照of the T7 promoter
Methods Mol Biol. 703:29 (2011)	Protocols for the synthesis of R做路NA by in vitro transcription
J Vis Exp. 61:3702 (2012)	ping, and transfection of mRNA
Protein Expr Purif. 9:142 (城時1997)	Protocol for expression a唱討nd purification o可河f T7 RNAP for in vitro transcrip畫答tion

亮點

我們的mRNA體外轉錄載體能(néng)高效用于T7 RNAP介導山間的體外轉錄。該載體在大腸杆菌中具有高拷貝複制能(néng)力，易于酶切，有助懂跳于大量生成(chéng)mRNA。

優勢

效率高：T7 RNAP是高效酶，其介導的體外轉錄可大量産生功能(néng)懂習性RNA。

技術簡單：操作簡便，比在細胞中表達mRNA容易，且在細胞中表達mRNA還(hái)技紅需要進(jìn)行轉染和細胞培養。

不足之處

方向(xiàng)特定：該載體系統隻含有單個體外轉錄啓動子，如需要有義和反義轉錄物，則需暗見要兩(liǎng)個載體。

失控轉錄：爲了産生正确有效的轉錄産物，在進(jìn)行轉錄反應之前需要通過(鐵信guò)限制性内切酶線性化質粒模闆。

載體關鍵元件

T7 promoter: A promoter for the坐文 RNA polymerase from T7 bacteriophage. 快低Drives high-level transcription 件少of the downstrea懂短m sequence of inte理湖rest.

Transcribed sequence: Your DNA sequence of interest to 著北be transcribed into RNA is placed here靜姐.

poly(A): Thirty base poly(A) track. Adds s日又tability to the tr坐通anscribed mRNA.

SapI, BsiWI, AscI: Unique restriction endonuclease sites 話下that can be used to lineari時文ze the plasmid prior to in vitro tr自遠anscription.

pUC ori: pUC origin of replication. Plasmids 厭門carrying this origin exist in hi影信gh copy numbers in E. coli.

Ampicillin: Ampicillin resistance gen道電e. It allows the plasmid to視是 be maintained by amp的能icillin selection in E. coli.

相關服務

mRNA體外轉錄載體