shRNA（3+1）套裝

shRNA的基因敲低效率通常在不同的shRNA設睡影計中差異巨大，因此從多個shRNA中篩選出最佳的shRNA設計對(duì)分綠于目的基因的表達幹擾實驗尤爲重要。雲舟生物提供的shRNA（3熱舞+1）病毒包裝服務有助于您選擇人慢實驗效果最好(hǎo)的shRNA。使用病毒載體可以高效地將(jiāng)這有車(zhè)些shRNA遞送進(jìn)哺乳動妹們物細胞。我們提供的shRNA載西子體病毒包裝類型包括慢病毒、AAV和腺病窗樹毒。

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shRNA（3+1）套裝設計工具（爲您目的麗窗基因定制3個shRNA載體并同時(shí)進(jìn)行病北拍毒包裝）。

shRNA（3+1）慢病毒套裝（二代/三代慢病毒）

服務類型	規格	交付内容	套裝價格（CNY）	周期
shRNA（3+1）慢病毒套裝制備	小規格	3個定制shRNA慢病毒（每個>10⁸ TU/ml，10x25 ul） Scramble shRNA對(duì)照慢病毒（>都對10⁸ TU/ml，3x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥7,680	10-19天
	中規格	3個定制shRNA慢病毒（每個>1森工0⁸ TU，10x100 ul） Scramble shRNA對(d男姐uì)照慢病毒（>10⁸ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），計內贈送	￥10,080
	大規格	3個定制shRNA慢病毒（每個>匠小;10⁹ TU/ml，10x100 ul） Scramble shRNA對(du笑工ì)照慢病毒（>10⁹ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），家計贈送	￥15,980
	超純化中規格	3個超純化定制shRNA慢病毒（每城草個>10⁹ TU/ml，10x50 ul）超純化Scramble shRNA對(duì)照慢病毒（&g腦綠t;10⁹ TU/ml，10x50 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送和個	￥19,580
	超純化大規格	3個超純化定制shRNA慢病毒（每個>10⁹ TU/ml，10x100 ul）超純化Scramble對(duì)照shRNA慢病毒（>10雜數⁹ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 一可ul），贈送	￥23,380
miR30 shRNA（3+1）慢病毒套裝制備	小規格	3個定制miR30 shRNA慢病毒（每個>1地笑0⁸ TU/ml，10x25 ul） Scramble miR30 shRN國離A對(duì)照慢病毒（>10⁸ TU/ml，3x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥9,280	12-24天
	中規格	3個定制miR30 shRNA慢病毒（每個>10⁸ TU/ml，10x100 ul相上） Scramble miR30 shRNA對(duì)照慢病毒來紅（>10⁸ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥11,980
	大規格	3個定制miR30 shRNA慢病毒（每個>1店懂0⁹ TU/ml，10x100 ul） Scramble miR30 shRNA對(duì)照慢病毒（>10⁹ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥17,580
	超純化中規格	3個超純化定制miR30 shRN學村A慢病毒（每個>10⁹ TU/ml，10x50 ul）超純化Scramble miR30 shRNA對(duì)如車照慢病毒（>10⁹ TU/ml，10x50 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul）木舊，贈送	￥21,080
	超純化大規格	3個超純化定制miR30 shRNA慢病毒（每個&謝子gt;10⁹ TU/ml，10x100 ul）超純化Scramble miR30 shRNA對(duì)照慢病毒（&g慢通t;10⁹ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式報說聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥24,880
IPTG誘導型shRNA（3+1）慢病毒套裝制備	小規格	3個定制IPTG誘導型shRNA慢病毒（每個>10⁸ TU/ml，10x25 ul） Scramble shRNA對(duì)照慢病毒民高（>10⁸ TU/ml，3x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥7,680	10-19天
	中規格	3個定制IPTG誘導型shRNA慢病毒（每個>10⁸ TU/ml，10x100 ul） Scramble shRNA對(d文開uì)照慢病毒（>10⁸ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），路放贈送	￥10,080
	大規格	3個定制IPTG誘導型shRNA慢病毒（每個>10秒子⁹ TU/ml，10x100 ul） Scramble shRNA對(duì)照慢病毒（&很歌gt;10⁹ TU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥15,980
	超純化中規格	3個超純化定制IPTG誘導型shRNA慢病毒（每個>10⁹ TU/ml，10x50 ul）超純化Scramble shRNA對(du喝下ì)照慢病毒（>10⁹ TU/ml，10x50 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送	￥19,580
	超純化大規格	3個超純化定制IPTG誘導型shRNA草報慢病毒（每個>10⁹ TU/ml，10x100 ul）超純化Scramble shRNA對(duì)照慢車新病毒（>10⁹ TU/ml，10x50 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式聚凝胺（5 mg/ml，200 ul），贈送樂一	￥23,380

注意：以上價格和周期包含載體構費海建

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shRNA（3+1）腺相關病毒套裝

服務類型	規格	交付内容	套裝價格（CNY）	周期
shRNA（3+1）腺相關病毒套裝制備	小規格	3個shRNA腺相關病毒（每個&g要得t;2x10¹¹ GC/ml， 10x25 ul） Scramble shRNA對(duì)照腺相關病毒（>2x10¹¹ GC/ml，3x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥8,580	10-19天
	中規格	3個shRNA腺相關病毒（每個>2x10¹¹ GC/ml， 10x100 ul） Scramble shRNA對(duì)照腺相關病毒（>2x10¹¹ GC/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥11,580
	大規格	3個shRNA腺相關病毒（每個>2x10¹² GC，10x100 ul） Scramble shRNA對(duì)照腺相關病毒（>2船音x10¹² GC/ml，10x100 ul暗離） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥17,780
	超純化小規格	3個超純化定制shRNA腺相關病毒（每個>線東10¹³ GC/ml，4x25 ul）超純化Scramble shRNA對行校(duì)照腺相關病毒（>10月分¹³ GC/ml，4x25 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥21,780	11-21天
	超純化中規格	3個超純化定制shRNA腺相關病毒（每個&g公湖t;10¹³ GC/ml, 10x50 ul）超純化Scramble shRNA對(duì)照腺相關病毒（>月校10¹³ GC/ml, 10x50 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥30,180
	超純化大規格	3個超純化定制shRNA腺相關病毒（每個&g藍謝t;10¹³ GC/ml，10x100 ul）超純化Scramble shRN我暗A對(duì)照腺相關病毒（>10¹³ GC/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥42,280

注意：以上價格和周期包含載體構建

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shRNA（3+1）腺病毒套裝（Ad5腺病毒）

服務類型	規格	交付内容	套裝價格（CNY）	周期
shRNA腺病毒（Ad5腺病毒）	小規格	3個定制shRNA腺病毒（每個>10¹⁰ IFU/ml，10x25 ul) Scramble shRNA對(duì)照北信腺病毒（>10¹⁰ IFU/ml，3x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥13,280	34-47天
	中規格	3個定制shRNA腺病毒（每個>10¹⁰ IFU/ml，10x100 ul）器年 Scramble shRNA對(duì)照腺病毒（員暗>10¹⁰ IFU/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥19,480
	大規格	3個定制shRNA腺病毒（每個>10¹¹ IFU/ml，10x100 ul） Scramble shRNA對(duì)照腺病毒（&你門gt;10¹¹ IFU/ml，10x100 u快裡l） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥27,680
	超純化中規格	3個超純化定制shRNA腺病毒（每個>10¹² VP/ml，10x50 ul）笑討超純化Scramble shRNA對子呢(duì)照腺病毒（>10¹² VP/ml，10x50 拍我ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥33,280
	超純化大規格	3個shRNA腺病毒（每個>10¹² VP/ml，10x100 ul）超純化Scramble shRNA對(duì)紅內照腺病毒（>10¹² VP/ml，10x100 ul） 3個定制shRNA載體，甘油菌形式	￥39,080

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技術詳情

當前我們提供慢病毒、AAV和腺病毒類型的shRNA（3+1）套裝。所他相有shRNA載體系統均經(jīng)過(guò)專門優化，在大腸文讀杆菌中具有高拷貝複制、可包裝産生高滴司錯度病毒并且對(duì)于靶細胞具有高效的轉導效章還率。常規的shRNA使用人U6啓動子驅動表達，在轉導細胞中可靶向議爸(xiàng)目的基因mRNA使其降解。對(duì)于AAV病毒師喝，我們提供以下血清型：1、2、3、4、5、6、6.2、7、8、9、rh10、理都DJ、DJ/8、PHP.eB、PHP.S、AAV2-retro、AAV會腦2-QuadYF和AAV2.7m8。

慢病毒載體

指南

AAV病毒載體

指南

腺病毒載體

指南

文檔

暫無

常見問題解答

如何計算shRNA幹擾分值？▼

我們設計和評估shRNA的規則與RNAi consortium微明（TRC）使用的規則類似。對(duì)于每個相人RefSeq轉錄本，我們會(huì)搜索出所有的21 m暗舊ers作爲候選靶位點。以下因素會(huì)降低幹擾效率/特異性或影響了亮克隆，含有這(zhè)些特點的序列將(jiāng)會(雪海huì)被(bèi)排除。主要因素包這明括：含有≥4個連續相同堿基，含有≥7個G或C，GC廠空含量<25％或> 60％以及序列的5'端含有AA堿基吃如。如果靶點内部含有莖環結構，或是3'末端的GC含量較高業子，或是該靶點是已知的miRNA核心序列或是會(huì)用開打靶到其他基因，則該靶點的分值就(jiù)會(huì)較低外做。若靶位點存在于一個基因的多個轉錄本，則該靶點的分值就(jiù子有)會(huì)較高。所有的幹擾分值均≥0近師，平均數約爲5，标準差約爲5，95%的分值均≤15問黃。若一個shRNA的幹擾分值是15，則表示具有很高幹擾效率且易于克隆；若愛玩幹擾分值爲0，則表示幹擾效果較差或難以克隆。

請注意幹擾分值隻是一個參考值。實際的幹擾效果可能(né議街ng)會(huì)與預測的分值有偏商匠差，低分值的shRNA也可能(行黃néng)産生較好(hǎo)的幹擾效果。同時(shí)，靶向(xiàng)轉數有錄本的 3’ UTR也可以起(qǐ)到幹擾作用。

爲什麼(me)我的shRNA對(上著duì)靶基因沒(méi)有起(qǐ)到幹擾作用？▼

并不是所有的shRNA都(dōu)會(司亮huì)起(qǐ)作用

根據我們的經(jīng)驗和來自客戶金大的反饋，使用3-4個shRNA進(jìn)行幹擾測業暗試時(shí)，通常隻有2-3個有比較合理的幹擾效果。所以，在使大弟用shRNA時(shí)，重要的是要認識到并非所有的shRNA都(dōu)能醫黑(néng)正常工作。通常情況下，約50-70％的shRNA到讀具有幹擾效果，其中隻有約20-務窗30％的shRNA具有比較明顯的效果。如果兒白您使用幾個shRNA靶向(xià購一ng)同一個基因都(dōu)沒(méi)有一個能(néng)産生滿意的幹她知擾效果，最好(hǎo)的解決方式是嘗試房對更多的shRNA，特别是那些經(jīng)過(guò)文獻驗證的shR廠現NA。目前，許多研究人員使用靶向(xiàng)相同基因的shRN吧作A庫（即不同shRNA的混合物）進(j北們ìn)行實驗，以期提高幹擾效率能哥。

幹擾效率檢測方法不當

最常用評估shRNA幹擾效率的靈敏測定方法是RT-qPCR，您可能(néng)照錢需要嘗試幾對(duì)引物，篩選出最具特異性和效率的引線都物對(duì)。通常情況下，RT-qPCR引物應跨越内含子，即設計在為這兩(liǎng)個外顯子上，以免擴增基因組DNA。當使用新引物時(多站shí)，建議您先進(jìn)行預擴增實驗，并將(jiāng)PCR産物購麗進(jìn)行電泳檢測目的條帶，或者甚至可以通過(guò)測序驗證PCR車明産物是否正确。在進(jìn)行RT制銀-qPCR的同時(shí)，應注意設置們城minus-RT對(duì)照以評估基因組DNA的污染水平。您可以使用NC對懂BI引物設計工具（https://www.日我ncbi.nlm.nih.gov/tools/笑吧primer-blast/）來檢查引物質量。幹雪哥擾效率也可以通過(guò)蛋白質印迹法（Western blot）進(j輛吧ìn)行評估。然而，該方法常産生來自非特異性抗體結合的假陽性條帶，從而導緻誤判這林沒(méi)有幹擾效果。因此，在使用時(shí)需要确保抗體的特異性。您腦電使用的shRNA可能(néng)隻打靶基因的某個轉錄本在設計shRNA時醫日(shí)，我們推薦您使用那些能(néng)靶向(家站xiàng)單個基因多個轉錄本的shRNA，除非您隻想打靶特定轉錄本。Vect話紙orBuilder提供針對(duì)常見物哥媽種(zhǒng)的shRNA數據庫。當您將(jiāng了什)shRNA元件插入載體時(shí)，您可以選擇shRNA數據庫，通過(guò們動)搜索目的基因查看所有可用的shRNA詳細信息。您還(hái)可以打開什靜(kāi)其中的UCSC鏈接，查看拿快shRNA序列在基因組和轉錄本中位置等信息。

您使用的shRNA可能(néng)隻打靶基因的某個轉錄本

在設計shRNA時(shí)，我們推薦您使用那些們用能(néng)靶向(xiàng)單個基因多個轉錄本的shRNA，除非您隻想打靶麗聽特定轉錄本。VectorBui章爸lder提供針對(duì)常見物種(zhǒng)的shRNA數據拍動庫。當您將(jiāng)shRNA元件插入載體時(shí)，您可以學商選擇shRNA數據庫，通過(guò)搜索目的基因查看所車有有可用的shRNA詳細信息。您還(hái)可以打我身開(kāi)其中的UCSC鏈接，查看shRNA序列在基因組和轉錄本中位置等信息可白。

我應該使用哪一種(zhǒng)病毒載體？▼

生物醫學(xué)研究中慢病毒、A西多AV以及腺病毒都(dōu)是常用的病毒載體，它們在應用以及性風舊能(néng)上各有優劣。

下表是當您選擇合适病毒時(shí)需要考慮的因素：

	慢病毒	AAV	腺病毒
組織嗜性	廣泛	取決于血清型	難以感染某些細胞
是否可感染非分裂細胞	是	是	是
病毒基因組穩定整合抑或遊離于宿主基因組	穩定整合	遊離的DNA附加體形式	遊離的DNA附加體形式
最大滴度	高	高	很高
自定義啓動子	是	是	是
應用	體外、體内實驗	體内實驗	體内實驗
體内免疫反應	低	很低	高

我們如何測定病毒滴度？▼

從細胞收毒後(hòu)，如果病毒載體帶有熒光報告基因，我們通常先將(jiān到的g)病毒轉導一些常見的細胞系（如293T或293電和A），觀察熒光的表達情況，從而檢驗病毒的質量。然後(hòu)根據病毒類型采取身車不同的方法來量化病毒的滴度。如果熒光觀察結果和定量測低離量之間存在較大差異，我們將(jiāng)進(jìn影站)行重新測量或額外驗證，以确保生産的病毒是高質量的。

慢病毒

我們使用p24 ELISA法測定慢病毒滴度。該方法的三明治用銀免疫試驗可測定HIV-1核心蛋白p24在慢媽農病毒上清液中的含量水平。我們首先在微量滴定闆上加入慢病毒樣(讀他yàng)本，然後(hòu)每孔加入HIV-1 p24捕獲離器抗體進(jìn)行孵育，并随後(hòu)添加生物素化的p2道拍4二抗以結合p24一抗。此後(hò學紙u)，樣(yàng)本中加入的辣根過(gu微暗ò)氧化物酶（HRP）标記的鏈黴親和素可特異性結個劇合生物素化的p24二抗。在最後兵火(hòu)一步中，加入辣根過(guò)氧化物酶底物反應液，鐵國經(jīng)HRP催化産生有顔色的産物。每個孔的顔色深度最終反映了慢購能病毒樣(yàng)本中的p24含量。使用分光光度計測量的樣(yàng)在又本吸光度數值與重組HIV-1的p24标準曲線進(jìn)行對(duì)照，小森然後(hòu)被(bèi)換算爲對(duì)應的慢問輛病毒滴度。

AAV

我們通過(guò)裂解AAV病毒顆粒，然後(hò唱書u)以qPCR測定裂解産物中的AAV基因組拷貝數（ITR區能區域的拷貝數）來獲取AAV的物理滴度（Ph站飛ysical titer）。AAV病毒顆粒通常十分我線穩定。我們制備的AAV均有活性且能(néng)男我在室溫下多天仍保持功效。因此我們的物理滴度非常接近實際的功關照能(néng)滴度。

腺病毒

對(duì)于腺病毒，我們測量的是功能(néng)滴度（Functi分不onal titer）。在293A細胞中轉導梯度稀釋的腺病毒後(hò飛視u)，我們使用我們采用基于免疫化學(xu兵近é)的方法對(duì)轉導成(chéng)功的細胞進(jìn)行計數來作頻代表病毒滴度。這(zhè)些細胞包含了腺病毒特異性六連體蛋白（Ad5 看我hexon protein），并且看也每個細胞被(bèi)看作一個感染單位飛男。細胞在非常低的感染複數的條件下被(bèi)轉導，以保證每個細胞隻廠紙被(bèi)一個腺病毒感染。這(zhè)種(zhǒng)實電關驗方法與傳統的噬菌斑試驗有良好(hǎo)的相關性。草房對(duì)于超純化的腺病毒，我們通過(guò)測定病毒顆粒的笑做光密度（OD260）來換算爲滴商離度（光密度與病毒的功效滴度有良好(hǎo)的相關性）。腺病毒具有相當好(hǎo離黑)的穩定性。我們制備的腺病毒在室微他溫下保存多天仍具有活性。

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