哺乳動物基因表達MMLV載體

MMLV逆轉錄病毒基因表達載體系統物小是一種(zhǒng)非常高效的現內，能(néng)把外源基因穩定整合到哺乳動物細胞基因組的系統，也是在iPS們聽細胞制備中特别受歡迎的基因轉導方法。

MMLV逆轉錄病毒載體來源于莫著家洛尼（氏）鼠白血病病毒，屬于逆轉錄病毒家族，野生型逆轉錄病毒基因組章數是線性雙正鏈RNA。

MMLV逆轉錄病毒重組載體構建完成(ch友民éng)後(hòu)與輔助質粒一煙可起(qǐ)轉染進(jìn)入包裝細胞。在包裝細胞中，位于兩(liǎ影南ng)個長(cháng)末端重複序列（LTRs）之間的舞票DNA片段會(huì)被(bèi)愛空轉錄成(chéng)RNA，由輔助質粒表麗化達的病毒蛋白將(jiāng)其包裝務黑形成(chéng)病毒顆粒。包裝後(hòu)的活體病毒將(jiāng間有)會(huì)被(bèi)釋放到農藍上清液中，可以直接收集或進(j厭和ìn)一步濃縮病毒轉染靶細胞。

當病毒轉導靶細胞時(shí)，釋放到宿主細胞中的病毒RNA借助逆轉錄酶逆轉錄光個成(chéng)DNA，然後(hòu)随綠問機整合進(jìn)宿主細胞的基因組中船看。在病毒載體中，位于兩(liǎng)個LTR的DNA得黑片段和病毒基因組都(dōu)會(huì)穩定整合到靶細胞的基因組中。

通過(guò)改造優化，我們的MMLV逆轉錄病毒載體删除了與病站笑毒包裝和轉導相關的基因（這(zhè)些基因由輔助商對質粒進(jìn)行表達，用于病毒包資筆裝過(guò)程）。因此，通過(g分區uò)逆轉錄病毒載體包裝産生的病毒是複制缺陷型的（日自隻能(néng)轉導靶細胞而不能(néng)自我複制），具有非常子會高的生物安全性。

關于MMLV逆轉錄病毒基因表達載體的更多信息，請參考以下文獻。

外源基因的穩定整合：常規質粒轉染隻能(néng)實現外源基因的瞬時(shí)表達，這舞男(zhè)種(zhǒng)外源基因會(huì)不事随著(zhe)宿主細胞的分裂而不斷丢失，在快速分裂的細胞中顯得尤爲北知顯著。相反的是，MMLV逆轉錄病毒轉導的目的基因能個知(néng)穩定地整合到宿主細胞的染色體組中 ，因而會(huì用笑)随著(zhe)宿主細胞的分裂而穩定遺傳。

宿主範圍廣泛：我們的病毒包裝系統包裝出來的病毒含有VSV-G北廠包膜蛋白，此蛋白擁有非常廣泛的親和算林性，可以轉導來源于人、小鼠和大鼠等常用的哺乳動物細胞和其它類型的細胞，但爸從不能(néng)轉導非分裂細胞（中著見下文不足之處）。

載體容量大：野生型的逆轉錄病毒基因組大小約爲8 kb，而在我們的逆轉錄病毒說朋載體中，病毒包裝和轉導的必要元件約爲2.5 kb，餘下5.5 kb的空間容納刀南客戶的目的序列。由于我們的載體隻允許插入一個O作朋RF，該裝載空間可以适用于絕大部分序列。

高水平表達：5' LTR包含了一個非常強的啓高放動子，能(néng)使目的基因高水平表達。

基因拷貝數相對(duì)均一：通常情況下，采用病毒轉導的方式可以比較均一的將(jiāng)外源基因轉入年這靶細胞中，而傳統的質粒轉染則呈現出較高的不均一性林空，導緻某些細胞會(huì)獲得較多拷貝質粒而某些海生則會(huì)獲得較少甚至完全沒(méi)有。

體内外實驗均有效：我們的載體不僅擁有良好(hǎo)的體外細胞轉導志通能(néng)力，同樣(yàng)适用于體内活體動物實驗。

安全性：爲了确保載體的安全性，我們將(jiāng)病毒包裝和轉這醫導所必需的基因由三個輔助質粒分别表達或者整合到包裝細胞基因組中進(小學jìn)行表達。因此，利用我們的載體包裝出來多技的活性病毒是複制缺陷型的。