哺乳動物基因FLEX條件性表達載體（Cre照電-Switch）

在哺乳動物細胞和動物中，該常規質粒FLEX（Flip-Ex刀呢cision）條件性基因表達載體系統草麗Cre-switch，通過(guò)Cre重組酶條件見問性控制兩(liǎng)個ORF的表達。F什謝LEX Cre-switch系統利用位于兩(liǎ懂從ng)個平行反向(xiàng)ORF兩(liǎ為做ng)側的Lox-變體重組位點，在Cre重人短組酶的調控下失活一個目的基因的表達，而激活另一個目的基因表達。

FLEX Cre-switch系統由兩(liǎ校報ng)對(duì)異型Lox-變體重組位長明點組成(chéng)，其中野生型序列稱爲LoxP，突變體稱爲Lo得土x2272，分别位于兩(liǎng)個基因ORF的我志兩(liǎng)側。 兩(大科liǎng)個ORF相互反向(xiàng)，其中一個ORF具有正确的讀碼方房務向(xiàng)（相對(duì)于啓動子）。兩(liǎng)種(zhǒng)章懂Lox-變體都(dōu)可被(bèi)Cre識别，但隻有相同的Lox位師路點對(duì)可以彼此重組，與其他Lox-變體不能(né綠高ng)進(jìn)行重組。LoxP和Lox2272位點以交替方子這式位于兩(liǎng)個ORF兩(liǎng)端，每對(du子著ì)位點互爲反向(xiàng)。Cre重組酶不存在的情況時(離聽shí)，第一個ORF由于其編碼方向喝木(xiàng)與啓動子方向(xiàng)相同，可以在客戶定制的啓動子驅動下正廠師常表達，而第二個ORF由于其方向(xiàng)相反則無法正常表達。在Cre的廠城存在下，LoxP和Lox2272位點對(duì)湖子分别重組，導緻兩(liǎng)個ORF方向(xiàng)反轉，且身新其中的一對(duì)重組位點將呢關(jiāng)具有相同的方向(xià秒兒ng)，Cre會(huì)介導産生正向(xiàng間門)重組切割，繼而分别留下一個不同的重組位點。 ORF方長弟向(xiàng)的反轉，使得第二個OR可服下以在啓動子的驅動下正常表達，而第一個ORF將(jiāng)不表達。 美水由于ORF側翼是兩(liǎng)個不同的Lox紅在-變體位點，所以即使存在Cre也不會(huì)進(jìn)一步發(白用fā)生重組。 

雖然該載體系統可用于組織培養細胞，但它更适用于制備轉基因動物。 熱可;攜帶這(zhè)種(zhǒng)載兒工體的轉基因動物起(qǐ)初會(huì)表達第一個ORF基因，當與攜帶組織特異靜的性Cre的轉基因動物雜交時(shí)，在攜帶兩(liǎng)綠鐵種(zhǒng)載體的後(hòu)代轉基因動物中，特照女别是在表達組織特異性Cre的細胞中，第二個ORF將(jiāng)會章報(huì)被(bèi)激活表達，而第一個O得那RF的表達將(jiāng)會(huì)失活。

抗性篩選或熒光基因可以添加到該載體中花人，以便于通過(guò)藥篩或者熒光篩選機少出永久整合外源基因的細胞。

關于該載體系統的更多信息，請參考以玩拿下文獻。

基因激活失活可控：兩(liǎng)個ORF的方向(xiàng)彼此相反确保當表飛日達正向(xiàng)方向(xià錯嗎ng)的ORF時(shí)，反向(xiàng算還)的ORF被(bèi)抑制，可防止基因發(山兵fā)生洩漏表達。

技術簡單：常規轉染即可把質粒轉入細胞，相比起(請明qǐ)病毒載體需要進(jìn)行病毒包裝，過(guò)程更簡單又秒。

載體容量非常大：我們的載體總容量可達30 kb，其中質粒骨架隻占3 kb，有足美要夠大的容量可以放置客戶所感興趣的序列。

高水平表達：常規質粒轉染細胞後(hòu)，可短了以産生非常高的拷貝數（每個細胞多達幾千拷貝麗短），使外源基因能(néng)高水平表達。

适用于動物體内研究：雖然該載體系統可用于組織培養細胞，但它更适東短用于制備Cre介導的條件性基因表達你能轉基因動物。

載體DNA非整合型：常規質粒在細胞裡(lǐ)主要以遊離DNA狀态存在，所以常規質粒轉染體懂也稱爲瞬時(shí)轉染。然而木件，質粒DNA也可以以非常低的概率水間永久整合到宿主基因組中（質粒轉染每10²~10⁶個細胞可能(néng)會(huì)有一個細胞的基因組被(bèi)整合，整道暗合效率取決于細胞類型）。如果將(jiāng)攜帶了藥物抗性基因或者習能熒光标記基因的載體轉到細胞中，在經(j子兒īng)過(guò)擴大和傳代培養後日就(hòu)，可以使用藥物篩選或細胞分選來獲得穩定整合了該載體的細胞。

可轉染的細胞類型受限：不同類型細胞的質粒轉染效率差異很大。非分裂細胞比分裂細胞更難轉裡就染，原代細胞比永生化細胞系更難轉水不染。一些重要的細胞類型更是難以轉染，如神經(jīng)元和胰島β細胞。另外，哥動質粒轉染局限于體外細胞實驗，很少購輛運用到活體實驗。

基因拷貝數在不同細胞中呈現差異性：盡管成(chéng)功的轉染可以在單個細胞裡(lǐ)産生非常高的拷貝數，但到坐不同細胞間卻有高度的差異性。在一些細胞中，質粒低雜拷貝數非常高，而在另外一些細胞卻是低拷貝甚至沒(méi)有。而病毒轉導更傾向(唱遠xiàng)于相對(duì)均勻地把基因轉到細胞中。