細菌在特定狀态下可吸收環境中的DNA,這(秒她zhè)種(zhǒng)狀态稱之爲少公感受态(competence)。冷大自然條件下的細菌吸收外源遺傳物質可适應外界不良環境議森的影響,但并非所有類型的菌株均有此能(né煙高ng)力。大腸杆菌(E. coli)是實驗室常用細菌類型。處于對(duì)數水機生長(cháng)期的大腸杆菌更容易形成(chéng)感受态慢森。爲了滿足實驗需求,人們通常使用理化計錢方式誘導工程菌菌株産生感受态, 可以更有效地控制外源DNA的導入。常高熱用轉化方法有化學(xué)和電轉兩(liǎng)種(zhǒng)(chemi金鐵cal transformation and elec到就troporation)。對(duì)一般克隆實驗來講,化學(xué)轉化實門友驗操作起(qǐ)來更簡易,不需要電轉設備和耗材。
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産品描述
VB UltraStable™ 化學(xué)感受态細胞知子(chemically competent cells)産品中的陽離子(ca爸美tion)能(néng)中和細胞爸哥膜表面(miàn)負電荷與質粒DNA分子自帶的負電荷,從而減可地少兩(liǎng)者之間的互斥作慢銀用,讓兩(liǎng)者的接近更加容易。此外,被(bèi)中和了的質粒弟算DNA由于分子内缺少了負電荷排斥力,更傾向(xiàng)折時友疊成(chéng)球型結構,而不是線性形态,更容易通過(guò)細胞膜。低溫科吃處理有助于降低細胞膜流動性,并使得膜表面關她(miàn)的LPS(O-polysaccharide)整齊計兵排列,讓質粒DNA更容易附著(zhe)于細胞膜。一旦DNA附著(zhe)開小于膜表面(miàn),此時(shí)熱激,細胞膜流動性增加,附著(為友zhe)的質粒DNA分子進(jìn)入細胞内。此時(shí)再秒服次低溫處理,細胞膜流動性再次降低,胞内的質市草粒DNA分子被(bèi)鎖住。
VB UltraStable™ 化學(xué)感受态細胞是一款樂人經(jīng)過(guò)優化的高轉化效率産品,突通友變了合成(chéng)LPS的galE基因,使其LPS變少,更容易捕黃鄉獲DNA,轉化效率可達>109 cfu/ug。
特點
- 适用于篩選和擴增含有重複序列的質粒,例如去她慢病毒載體、逆轉錄病毒載體和腺相關病毒載體。
- 攜帶突變的recA基因,避免同源序列之間的重組。
- 攜帶突變的endA基因,避免提取的質粒DNA含訊市有核酸內切酶I污染。
- 攜帶突變的fhuA基因,使該菌株抗噬菌體T1。
- 有效轉化真核來源的甲基化DNA,車著以及PCR、cDNA等來源的非基甲基化D新到NA(mcrA-, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC))。
- ccdB敏感型,适合Gateway克隆産物的轉化。
- 表達lacZ基因的omega片段,适合含有alpha片段的載體的藍白志車斑篩選。
菌種(zhǒng)類别
E.coli K-12
基因型
F’[∆ccdAB proAB+ lacIq lacZ∆M15 zzf::Tn10 (TetR)] recA1 endA1 fhuA mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZ∆M15 ∆(ara, leu)7697 araD139 ∆lacX74 galK16 galE15 e14- relA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1
運輸條件
幹冰
存儲
-80°C(化學(xué)感受态技弟細胞的轉化效率随存儲時(shí)間增加逐漸降低,推薦收到貨後(hòu)3個月内知在盡快使用以獲得最佳的轉化效果)
文檔
使用說(shuō)明書
VB UltraStableTM chemically competent ce科電lls