雲舟生物提供全面(miàn)的Tet誘導基體知因表達解決方案，幫助您實現使用四人靜環素調控表達目的基因。我們提供範圍廣泛的預制和定制載體，可根據您的實驗目标量鐘物身定制非病毒的、病毒的和轉座子骨架。我們具醫的備多種(zhǒng)主要的病毒載體（如慢病毒、AAV、腺病電微毒）的包裝能(néng)力，可將(jiāng)Tet系統成(公民chéng)分高效遞送到難轉染細胞中。我們還(兒個hái)可以構建Tet誘導型基因表達細胞穩轉株。這(zhè)類細胞吃分在四環素或其類似物（例如強力黴素）作用下習在您的目标基因可有效和可靠地被(bèi)誘導表達。
亮點
定制Tet調控表達載體
雲舟生物提供多種(zhǒng)定制Tet載體腦空，可將(jiāng)四環素誘導型基因表達用內盒有效地遞送到靶細胞中。使用我們高度直觀的在線載體設計平台，您可以從數量很拍衆多的載體骨架（非病毒、病毒或轉座子）和載體元件（啓動子市是、ORF、熒光和藥篩标記）的無限組合中進(jìn)行搭配選擇，以定道生制您的目的基因Tet調控表達載體。兵國
將(jiāng)CRISPR載體添加到您的購物車時(shí)，您還(hái)可西年以在其下遊服務購買質粒DNA制區光備、RNA制備和病毒包裝。
TRE驅動的目的基因表達載體和Tet調節蛋白表達載體不是一姐得體化的Tet載體。要實現Tet調控的基因表達，您需要在靶細胞中同時輛科(shí)表達目的基因（由TRE啓動子得技驅動）和Tet調控蛋白。
第二代Tet系統采用TRE啓動子，可與rtTA、tTS、tTA好哥等Tet調控蛋白相互作用。第三代Tet系統使用TRE3G月月啓動子，對(duì)應的Tet調控蛋白爲Tet3G。
在設計雙載體系統時(shí)，需要爲TRE驅動的目的基因表達載體和Tet調南農控蛋白表達載體選擇兩(liǎng)種(zhǒng)不同的藥篩标紙她記。如果您的實驗系統已經(jīng)包含一個标記（電答比如靶細胞表達抗生素抗性基因時都外(shí)），請檢查其與您的Te讀木t載體上的藥篩标記的兼容性。
常用Tet調控表達載體
雲舟生物提供一系列常用的Tet調控表達載體，既包含一體化坐火載體也包含雙載體系統。將(jiāng)他自這(zhè)些Tet載體添加到購物車時火什(shí)，您還(hái)可以購買質粒DNA制備和病毒包裝作爲下遊服務。
TRE驅動的目的基因表達載體和Tet調節好靜蛋白表達載體不是一體化的Tet載體。要實現Tet調控的視你基因表達，您需要在靶細胞中同時(shí)表達目的基因（由TRE啓動子驅動）近了和Tet調控蛋白。
構建表達tTA、tTS 和/或 rtTA的細胞穩轉株需要使用看雜 Tet 調控蛋白表達載體。
一體化載體系統（Tet-on）
注意：如果您需要Tet-On慢病毒載體，請發(fā)送設計咨我作詢給我們。
TRE驅動目的基因表達
Tet調控蛋白表達
如果您未能(néng)找到您需求的Tet載體，請發(fā)送設計咨詢錯件給我們，我們將(jiāng)爲您提供專業的技術一用支持服務。
Ter載體的病毒包裝
雲舟生物可提供各種(zhǒng)規模的慢病毒、能水AAV 和腺病毒的優質病毒包裝服務，可高效地將(j不外iāng)Tet誘導型基因表達系統遞送門公到難轉染細胞中。我們的病毒包裝使用我們專有的技術和自我研發(fā)雨答的試劑，大大改進(jìn)了産毒的滴業相度、純度、活性和一緻性。我們的包裝方案還(hái站月)會(huì)針對(duì)我們的載行林體構建服務中使用的病毒載體系統進(jìn)行優化。
目的基因Tet誘導表達細胞穩轉株
雲舟生物可以定制并構建Tet誘導表達細胞穩轉株，這(zhè)些細胞隻有北訊極低的背景表達，并且可以高水平誘導表達您事鐘的目的基因。此外，我們可以構建tTS/rtTA表達細胞株，然後(hòu)用我弟攜帶TRE啓動子驅動表達目的基因的質粒/病毒新銀進(jìn)行轉染/轉導該細胞，可靈活适應不同的實驗方案并帶來可靠的基因誘家有導效果。對(duì)于Tet-On細胞穩轉株，目的基聽請因的誘導表達水平經(jīng)過(從科guò)RT-qPCR驗證。此外，我們在交付最找的細胞株産品前，土聽還(hái)會(huì)進(jì不計n)行一系列标準QC檢測，例如無菌檢測到又和支原體檢測。
| 細胞株模型 | 構建方式 | 交付内容 | 價格（CNY） | 交付周期 |
|---|---|---|---|---|
| tTS/rtTA表達穩轉細胞株 | 慢病毒轉導 | 多克隆細胞群 | ￥15,300.00起(qǐ) | 7-9周 |
| 3個單克隆細胞株 | 3個單克隆細胞株 | ￥29,300.00起道不(qǐ) | 9-15周 | |
| Tet-On基因表達穩轉細胞株 | 慢病毒轉導 | 多克隆細胞群 | ￥25,100.00起(qǐ) | 10-16周 |
| 3個單克隆細胞株 | 3個單克隆細胞株 | ￥41,200.00起(黃的qǐ) | 13-21周 |
四環素（Tetracycline）誘導基因表達不遠
四環素誘導基因表達系統是在哺乳動物細胞中控制目輛東的基因表達時(shí)機的強大工具（圖1）。我們提供Tet-On和T計線et-Off兩(liǎng)種(zhǒng)調控系統，以幫助您實湖身現對(duì)目的基因高度特異的、且依商月賴四環素劑量的調控表達。 我們的Tet-On載體系統旨在用于當沒些紅(méi)有四環素存在的情況下，針對(duì)目的基因實現其表達背景的完全沉子錯默，并可在添加四環素時(shí)誘導其強烈、土唱快速的表達。這(zhè)是通過(guò)動河一個多元件系統來實現的，該系統結合了在沒(mé是慢i)有四環素的情況下tTS蛋白可進(jìn)行主動沉默林亮表達和在四環素存在的情況下rtTA蛋白進(jìn)行強力激活表達的慢做雙重機制。在沒(méi)有四環素的情況也道下，作爲TetR（Tet阻遏蛋白）算他和KRAB-AB（Kid-1蛋白的轉錄阻遏結小醫構域）融合産生的tTS蛋白與TRE啓動子結合，導緻基因轉錄被(bè門南i)主動抑制。另一方面(miàn火訊)，rtTA蛋白，作爲一種(z區海hǒng)rTetR（突變的Tet阻遏物）和VP16知機（單純疱疹病毒病毒體蛋白16的轉錄激也畫活子結構域）的融合蛋白，當四環素的存區術在時(shí)其與TRE啓動子的結合則可以激活基因轉錄。我們的些學Tet-Off載體系統可用于在當四環素存在的情況下，通過(guò)tT女懂A蛋白與TRE啓動子的結合，對(d妹志uì)靶基因實現調控性的抑制表達。
圖1 Tet-On和Tet-Off系統調控基因表達（Dox：多西環素，空愛一種(zhǒng)四環素類似物）飛年
通過(guò)Tet系統誘導表達目的基因在一系我外列基因誘導表達方式中具有廣泛的優越性，這(zhè)些特點可被(生能bèi)總結爲下表：
| Tet誘導表達系統 | 其它基因誘導表達系統 | |
|---|---|---|
| 調控性 | 無四環素情況下洩露表達極低。 | 由于轉基因的基礎表達，在沒(m愛謝éi)有添加誘導劑的情況下會(huì)出現高水平的洩露表達，如使用他莫昔芬的誘道筆導系統，或者使用核糖體開(kāi)關機制的誘導系統。 |
| 誘導水平 | 四環素存在時(shí)，可實現快速且高水平（1000倍）的目的基因表達。 | 較低的誘導表達水平（100倍），如如使用他莫昔芬的誘導系統，或者使用核糖體開章劇(kāi)關機制的誘導系統。 |
| 可逆性 | 移除四環素後(hòu)，誘導表達效果笑科可逆。 | 不可逆的激活表達，如使用他莫昔芬的誘導系統。 |
| 毒性 | 進(jìn)行高水平誘導表達時(shí)使用的四環素含量水平水計不會(huì)産生毒性。 | 顯著的細胞毒性，如使用他莫昔芬的誘導系統。 |
| 性價比 | 四環素作爲誘導劑，易于獲取且成(chéng)本低廉。 | 誘導劑昂貴，如使用荷爾蒙作爲誘導劑的系統。 |
| 多效作用（Pleiotropic effects） | 由于不引入原核生物序列，最小化坐小了引發(fā)多效作用的可能(néng)。 | 激活非靶向(xiàng)的内源基因，多效作用風險顯著，如使用蛻皮激素男志的誘導系統，或者使用CID的誘導系統。 |
一體化（All-in-one）載體與雙載體系統
爲了實現四環素調控的目的基因激活或抑制表達，靶細胞必須同時(shí)共靜師表達由TRE啓動子驅動的GOI和都慢Tet調節蛋白（tTA、tTS和/或rtT科聽A）。這(zhè)可以在一體化載體中同時(shí)表達問通目的基因和Tet調控蛋白，或者通過(guò)使用雙載體光山系統——目的基因和Tet調控蛋白各自在獨立的載體上會畫表達來實現。一體化載體的優勢在于，它可以使用風影單一載體將(jiāng)Tet調控基因表達系統所需的所有成(ché聽水ng)分直接遞送至細胞。在雙載體系統中，實現窗村目的基因和Tet調控蛋白在靶細胞共表達需要用兩(liǎng)種(zhǒn為現g)質粒/病毒對(duì)靶細胞進(jìn)行共轉染/共轉導，在媽而這(zhè)在技術上更具挑戰性，因爲并非所有靶細胞都(dōu)會(h物下uì)成(chéng)功轉染/轉導兩(liǎng)種(zhǒng路呢)質粒/病毒。使用雙載體系統的另一種音文(zhǒng)方式是用攜帶目的基因的質粒/病毒轉染/轉導已經(jīng)校著穩定表達Tet調控蛋白的細胞或生物體。然而，這(zh妹我è)種(zhǒng)方法的問題在于相當費時(shí)費力。雙載體系也有吃雜一定的優勢，它可以靈活使用表達相同的Tet調控蛋白的質粒、病毒或細胞很讀系去搭配多種(zhǒng)不同的目的基因表達質粒/病毒。
組織特異性的Tet誘導表達
雲舟生物提供兩(liǎng)種(zhǒng)類制公型的一體化Tet-On載體系統：标準形式和低洩漏形式，以幫助您實現目的基因的科上組織特異性誘導表達。對(duì)于标準的Tet長費-On載體系統，作爲融合蛋白的tTS和河化rtTA其表達使用用戶選擇的組織特異性啓動子進(jìn)信好行驅動，而低洩漏Tet-On載體系統物雪則使用廣泛啓動子來驅動tTS表達，同時(shí)使用用戶選擇的組東低織特異性啓動子驅動rtTA表達。低土都洩漏形式的載體設計具有特别的優勢：在無四環素的情況家章下最大限度減少非靶組織中的洩漏表達，同時(sh醫到í)允許在四環素存在的情況下對(duì)目的轉黃又基因進(jìn)行組織特異性誘導表達電近。
試驗驗證
與通常的僅依賴rtTA的Tet-On載體系統在非誘導的情和刀況下具有顯著(zhe)的滲漏表達的情況不同，我們的表達tTS/rtT少的A的Tet-On載體系統是一個真正的利用四環素作爲開(kāi)關費化來調控基因表達的系統，可以最大限度地減少非誘導時(shí)的謝城背景表達，并且在四環素誘導時(shí)的具有相當高的靈敏亮雪度和高的動态範圍（圖2）。在無四環素的情況下，tTS蛋白與TRE啓動子校微結合，從而主動抑制基因轉錄，從而最大限度地減少背景表達。另一方面(m船們iàn)，rtTA蛋白僅在四環素存在的情況下與TRE啓動子結合以激活基因轉錄司中。
- Dox+ Dox
圖2 向(xiàng)HEK293T細胞轉染以下載有師體：表達EGFP和rtTA的一體化載體（Tet-On）（上）、劇車表達EGFP和tTS/rtTA的一體化載體（Tet-On）（下）。轉染後(hò在畫u)48小時(shí)，對(duì)添加多西環素一樂（+Dox）和不添加多西環素（-Dox）的細胞分别檢測EGFP表達。
對(duì)于使用慢病毒遞送方式的Tet載體系統，我一校們通常不建議使用一體化的載體設計。根據我們的内歌嗎部數據和許多客戶的反饋，使用一體化載體設計不來的慢病毒的其基因誘導表達效率取決于具體實驗并且通常不能(néng)令人滿意都制。一體化的載體通常包含兩(liǎng)個基因表達盒：由TR區電E啓動子驅動的目的基因表達盒和Tet調控蛋白（如tTA、tTS和/或rt你著TA）表達盒。對(duì)于慢病毒載體，攜帶多個基因表達盒有時相術(shí)會(huì)出現問題，因爲正确包裝雜理病毒的生物學(xué)要求與不同表達盒獨立表達的需求之間可能(néng)船下存在沖突。在慢病毒載體上，内部核苷酸多腺苷化信号不能(néng)放置在兩銀輛(liǎng)個LTR之間，因爲這(zhè)會(哥船huì)阻斷病毒包裝過(guò)程。因此，由上遊啓動子啓動的轉錄不會(huì)弟到在上遊ORF的末端停止，而且會(huì)進(jìn)一步通過(gu裡中ò)轉錄啓動子和ORF，這(zhè)會(huì)導緻下書人遊ORF的表達發(fā)生部分抑制。在一體化慢病毒載體中，由于T習們et調控蛋白位于目的基因下遊，它們的表達會(huì)大大降低制們，從而導緻洩漏表達和誘導效率低下等鄉舞問題（圖3）。
- Dox+ Dox
圖3 使用雙載體（Dual）系統和一體化（All-in-One）載年懂體系統的Tet-On慢病毒轉導HEK293T商讀細胞表達EGFP。對(duì)于秒這雙載體系統，TRE啓動子驅動表達的可林慢病毒載體轉導表達tTS/rtTA的穩轉株。轉導後(hòu)48小時(shí)議道，對(duì)添加多西環素（+信東Dox）和不添加多西環素（-Dox）的細胞進(jìn)行EGFP表達檢測。
此外我們的在線“學(xué)習中心”包含豐富的學(xué)習東知資源，可幫助您安排并實施您的Tet基因誘導到話表達實驗。
暫無
任何成(chéng)功實驗設計的關用信鍵因素之一是選擇合适的用于將(jiān廠麗g)目的基因遞送到靶細胞中的載體系統。對(duì)于選擇哪一種畫年(zhǒng)病毒和非病毒載體遞送系統，應考慮以下關鍵考區兵慮因素：您的靶細胞是容易轉染還(há雜是i)是難以轉染的？您想要瞬時(shí)表達還(跳美hái)是穩定整合到宿主基因組中的長(cháng)期表達？您是否美校需要使用自定義的啓動子來驅動表達目的基因？ 您的載體將(j現不iāng)用于體外細胞實驗還(hái)是體内實驗？您需要條件空船性或誘導性基因表達嗎？您的目的基因有多大？
下表總結了常用的幾種(zhǒng)載體系統以及根據實驗黑理需求選擇合适的載體系統的所考慮事(shì)費議項：
| 常規質粒載體 | 病毒載體 | 轉座子載體 | |
|---|---|---|---|
| 轉染法遞送 | 是 | 否 | 是 |
| 瞬時(shí)表達或者穩定整合表達 | 瞬時(shí)表達 | 穩定整合 | 穩定整合 |
| 要求病毒包裝 | 否 | 是 | 否 |
| 裝載量 | 大 | 小到中 | 中到大 |
| 主要用途 | 體外細胞實驗 | 體外/體内實驗 | 體内/體外實驗 |
| 自定義啓動子 | 是 | 取決于病毒載體類型 | 是 |
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