果蠅基因表達att位點整合載體pUAS現關TattB

我們的pUASTattB載體系統是一個高效的轉基因果蠅制備湖樹和基因表達控制系統。該系統利用噬菌體舞大φC31整合酶介導的重組實現靶向(xiàng)基因有效插入，并結合外玩強大的誘導型啓動子Gal4調節轉基因表達。pUASTattB載體系統類似哥快于pUAST系統，然而它是利用頻懂φC31整合酶介導重組而不是基于P元和友件的轉座實現目的基因的插入。

噬菌體φC31整合酶能(néng)高效介導噬劇子菌體附著(zhe)位點（稱爲attP）和細菌附著(zhe北店)位點（稱爲attB）之間的序列特異性重組。與基于轉懂紙座子系統（如P元件介導的重組）相反，φC31介導的插入是不可逆的。p票匠UASTattB整合到attP位點後(hòu)會離見(huì)産生兩(liǎng)個新的位點（attL和a綠開ttR），新的位點將(jiāng)不再被(bèi)φC31說地整合酶識别。另外，基于φC31的插入是具有位點特異性的，通常僅在綠東attP位點發(fā)生。基于這(zhè)個原因，pUA藍湖STattB載體系統通常用于攜帶att微也P“著(zhe)陸位點”的果蠅系。

pUASTattB系統包含兩(liǎng)個載體，一友內個稱爲pUASTattB載體或是攜帶attB位點和目的基因的φ哥亮C31供體載體；另一個爲編碼φC31整時通合酶的輔助載體。當pUASTattB和φC31輔助質粒共同注射到含有知家attP位點的細胞時(shí)，φC31整合酶介導at房謝tB和attP位點之間發(fā)生重組，導緻pU鐘視ASTattB載體線性化并整合到宿主基因組中。 mini whit算美e基因的表達，可以使果蠅的眼色發(f哥人ā)生變化，是鑒定轉基因果蠅成(chéng)功與否的标記。月訊

將(jiāng)φC31整合酶引入果蠅宿主有多種(zhǒng)方法，可以使用體什業外轉錄産生的φC31整合酶mRNA注射靶細胞樂但，也可以將(jiāng)表達φC31整合酶的做林輔助質粒與pUASTattB載體一起(qǐ)共注射到細胞中。此外，也可以利用吃的φC31整合酶果蠅系實現基因的高效插入。

在pUASTattB系統中，目的基因將(jiā微司ng)被(bèi)克隆到合成(chéng)誘導型啓動子的多子下遊，該啓動子由5個串聯排列的G中視AL4結合位點（5xUAS）和hsp70火對 TATA box組成(chéng)。目的基因對船依賴于GAL4的表達，GAL4蛋白在與pUA說長ST質粒上的UAS位點結合後(h畫如òu)會(huì)激活目的基因的轉錄。因吧一此，在沒(méi)有GAL4表達的情況下，目的基因保農購持沉默，但是通過(guò)與表達GAL房就4的果蠅系雜交後(hòu)，在GAL4表達的細胞中，雨內目的基因會(huì)被(bèi不微)轉錄激活。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻離裡。

特定位點插入：基于φC31的插入具有位點特異性，通常僅發(fā)動雨生在attP位點，降低了破壞内源基因或插入位點不當影響轉基因表達的風險。

高水平表達：5×UAS/mini_Hsp70啓動子可以在誘導狀态下舞要使目的基因高水平表達。

選擇性表達: 不存在GAL4的情況下，目的基因的轉錄水平很低或沒(m文麗éi)有；在GAL4的存在下，則能(néng)實現高南站水平的基因轉錄。

高效：使用φC31整合酶實現種(zhǒn遠說g)系轉基因比基于P元件的載體系統如少這pUAST更有效。