AAV組織分布鑒定

重組AAV病毒近年來已成(chéng)爲用于基因治療和舞電疫苗開(kāi)發(fā)的熱門基因遞送載體。在早期臨床研究中，爲測試A慢門AV載體在體内的可靠性和安全性，站人一個關鍵的問題便是需要鑒定其在多種(zhǒng)器官和組織明學中的分布情況與留存時(shí)長(cháng)。

目前雖有一些研究報道(dào)了常用血清型的 AAV的組織分布模式，但樹物是這(zhè)些研究提供的數據下南量上還(hái)未能(néng)達到臨床應用的要求。現今的AAV組織分布著關鑒定方法通常僅具有器官水平的分辨率，白就而沒(méi)有深入到亞器官水平上的不同細胞類型。而且這(zhè)道能些研究通常隻專注于使用靜脈注射的方式輸送AAV，同時(shí)金門缺乏其它給藥途徑的嘗試。此外更顯著的問動商題是，當前大多數實驗都(dōu)是唱湖在齧齒類動物身上進(jìn)行的，而這(zhè)些短頻動物由于與人類在進(jìn)化和生理上高度差異，從計知這(zhè)些動物獲得的數據結果令人懷疑是否同樣(yàng)适用于人類。當前弟廠許多新開(kāi)發(fā)血清型，包括天然的和人工合成個媽(chéng)的，完全缺乏詳細的組織分布數據。令這(zhè)些問題更複答南雜的是，鑒于不同的轉基因在體内會(huì)引發(fā)有匠很差異性的細胞反應，如先天免疫反應，即使是包裝成(chéng)相同血友得清型的不同轉基因載體也會(huì)具有不公劇同的組織分布模式。

載體家提供的AAV組織分布鑒定服務將(jiāng)國志有助于克服以上的問題，爲您獲得特定物種(zhǒ說區ng)的高分辨率的AAV組織分布圖像。值得一提的是，我們還(hái商秒)可以在非人靈長(cháng)類（Non-human pri少知mate，NHP）中進(jìn)行該實驗。從小鼠模型生花到猴模型，我們提供的是當前産業界物種(友技zhǒng)跨度最完整的AAV組織分布鑒友船定服務。

如何獲取AAV組織分布鑒定服務？

點擊主頁上的“發(fā)送需求咨詢”按鈕在線提交您的需求，我們的技術人員件少會(huì)向(xiàng)您發(fā)送包含價格、周期和其他相關信息多相在内的服務方案。

服務亮點

• 全方面(miàn)的服務平台：載體家是當前全球唯一一家具備AAV臨床前、臨鐵到床CRO和CDMO一站式服務的企業。我們的AAV相關服務就音涵蓋載體設計、載體優化、載體克隆要她、文庫構建、病毒包裝、衣殼定向(xiàng)有那進(jìn)化和工程改造、AAV組織分布事做鑒定、GMP病毒生産等。
• 使用包括非人靈長(cháng)類在内的多種(zhǒng)模式生物：我們提供一系列模式生物用于進(jìn)行AAV組織分布鑒麗們定，如小鼠、大鼠、以及重要的兩(liǎng)種(zhǒng)非綠子人靈長(cháng)類：食蟹猴火醫（Macaca fascicularis）和猕猴（Macaca M書林ulatta）。所有體内試驗均在經(jīng)過(guò)AAA去司LAC認證的機構中以專業認可的方式進(jì來遠n)行。
• 多種(zhǒng)分析方法：我們提供多種(zhǒng)方式鑒定AAV在器官、組織和細胞紙月水平上的分布鑒定，包括報告基因熒工林光成(chéng)像、流式細胞儀分離熒光陽性細胞、熒吃一光素酶報告基因活性測定、qPCR測定基因組拷貝數、RT-PCR分析目的基因表達他身等。
• 使用barcode和NGS技術複見木合分析：許多AAV的臨床前管線需要對(duì)河玩比多種(zhǒng)載體的組織分布，然後(hòu)選擇最合适的用于後(hò動木u)續研究。這(zhè)之中的情況可能(néng化藍)有同樣(yàng)的基因載體用不同的血清型衣殼包裹，也可能電歌(néng)是同樣(yàng)的一個血清型看玩衣殼包裹了不同的基因載體。載體家開(kāi)發(fā)的專空線有平台可以在同個物種(zhǒng)中鑒定不同AAV基因腦年載體的組織分布。具體而言，每個基因載體均帶有一個barcode。在給定組暗理織中，通過(guò)NGS測定這林雪(zhè)些barcode就(jiù)能(néng)兵開鑒定這(zhè)些AAV載體的基因組DNA或mRNA在組織中海飛的分布模式。該方法可以顯著地減少鑒定的成(chéng)本和時(shí)長(c人視háng)，更關鍵的是，該方法允許在組熱化織中轉導高豐度的互爲内參的不同類型載體，從而增加了數據的花書靈敏度和可靠性。
• 可提供多種(zhǒng)AAV血清型：我們提供一系列常用的血清型衣殼用于包裝您的AAV載體（血清要地型1-9、rh10、DJ、DJ/8、PHP.e制分B、PHP.S、AAV2-retro、AAV都新2-QuadYF和AAV2.7兒司m8）。我們還(hái)能(néng)根據您的需求快速開(kāi)會房發(fā)新的血清型。
• 多途徑給藥：我們可使用多種(zhǒng)方式注射AAV，如尾靜脈注射、面(miàn)靜好筆脈注射、腦室内注射、鞘内注射、視網膜下注射、玻璃體内注射、鼓室内注射和肌肉注射影筆等。
• 完善的技術支持：我們的科學(xué)家在AAV項目上具有深厚的經(jīng)驗，能(nén人笑g)夠爲您提供全面(miàn)的技術支持，包括載體設計唱光、病毒包裝、GMP生産、細胞培養分機長析以及動物手術等。

試驗數據

以下數據爲我們測試的不同血清型AAV在多種(zhǒng)組織中放人的分布情況：

圖1 小鼠多種(zhǒng)方式注射AAV9-CAG-EGFP理高，對(duì)多種(zhǒng)器雨空官組織取材、制備冷凍切片，激光共聚焦顯微鏡觀察：（A老熱）内耳，左耳鼓室内注射後(hòu)第13服藍天；（B）海馬和脊髓前角，面(miàn)船你靜脈注射後(hòu)第10天；（C）視裡醫網膜、肝、胰腺和骨骼肌，尾靜脈注射後山音(hòu)第12天。

圖2 小鼠尾靜脈注射AAV1-CMV化開-EGFP。注射後(hòu)第12天，處死取材，制備冷凍切片。畫但激光共聚焦顯微鏡觀察。

圖3 小鼠視網膜下注射AAV8。注射後(hòu)第20天，處樂件死取材，制備冷凍切片。激光共聚焦顯微鏡觀路信察。（A）AAV8-ProA1-mCh用他erry（B）AAV8-hRHO-EGFP。

圖4 向(xiàng)出生48小時(sh和不í)的新生鼠（2隻雄性、1隻雌性）靜脈注射AAV9（~1呢醫.5x10¹⁰ GC）。注射第六周後(hòu)，q機跳PCR檢測小鼠各個器官中的AAV拷貝數。