植物基因表達質粒載體

概述

將(jiāng)常規質粒載體導入植物細胞原生質體是一種(zhǒng)廣泛明街的使用方法，可通過(guò)化學(xué)轉化或電轉完成(chéng)。雖然習美已經(jīng)開(kāi)發(fā)了其他基因表達載體系統（如雙元載體）知子，但常規質粒基因表達載體仍被(bèi)大農短多數實驗室使用，這(zhè)主要得益于其在技術上的簡便性以及在植物細胞中民些的高效轉染率。常規質粒載體轉染的關鍵特點是短暫性，并且在宿主基因組中的兵空整合效率非常低（通常小于1%）。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。

參考文獻	主題
Biolistic and other non-Agrobacter下唱ium technologies 綠放of plant transformation, In務男 Plant Biotechnology and Agr山長iculture. Academic Pr習要ess, San Diego, 2012, Page作女s 117-129	Overview of plant transge就下nic methods using regular plasmid 小冷vectors.
GM Crops. 1:276 (2010)	Overview of plant tra購少nsgenic methods.

亮點

我們的載體系統已經(jīng)過(guò)優化，其在大腸杆行化菌中具有高拷貝複制能(néng)力，可對(duì)暗業植物細胞進(jìn)行高效轉染，實現外源基因的高水平表達。

優勢

技術簡單：可通過(guò)化學(xué)轉染或電轉直接將(jiāng)質粒載體紅船導入到植物細胞中，而不需要額外的細菌菌株和克隆步驟。費微

載體容量非常大：我們的載體總容量可達30 kb，其中質粒骨架隻占3 kb，有足夠男藍大的容量可以放置客戶所感興趣的序校金列。

高水平表達：常規質粒轉染細胞後(hòu)，可以産生非常高的拷貝數好木（每個細胞多達幾千拷貝），使外源基因能(néng)高水平表些我達。

不足之處

載體DNA非整合型：常規質粒在細胞裡(lǐ)主要以遊離DNA狀态存在，所以常規質粒轉染也稱腦在爲瞬時(shí)轉染。然而，質粒DNA也可以以非常低的化腦概率永久整合到宿主基因組中（質粒轉染每10²~10⁶個細胞可能(néng)會(huì)有一個細胞的基因組被(bèi)整合，整拿多合效率取決于細胞類型）。如果將(jiāng)攜帶了藥物抗性基因或者購會熒光标記基因的載體轉到細胞中，在經(jīng)過(guò)擴大麗通和傳代培養後(hòu)，可以使用藥物篩選或細胞分選來獲得穩定整合了該又身載體的細胞。

可轉染的細胞類型受限：不同類型植物細胞的質粒轉染效率差異較報我大。

基因拷貝數在不同細胞中呈現差異性：盡管成(chéng)功的轉染可以在單個細胞裡(lǐ)産生非常高的拷貝數，但司說不同細胞間卻有高度的差異性。在一些細胞中，質粒拷貝數非常高，麗看而在另外一些細胞卻是低拷貝甚至沒(méi)有。謝拍

載體關鍵元件

Promoter: The promoter driving your gene of樂得 interest is placed here.

Kozak: Kozak consensus 開暗sequence. This is placed in front道妹 of the start codon of the ORF 些說of interest to facili票路tate translation initiation in eukaryot師河es.

ORF: The open reading如輛 frame of your gene of inter地玩est is placed here票秒.

Nos pA: The nopaline synthase著秒 polyadenylation signal of 煙地Agrobacterium tu視問mefaciens. This facilitates transcrip明少tion termination of the upstre醫體am ORF.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It all鄉月ows the plasmid to b工拿e maintained by ampicillin 腦現selection in bacterial hosts.

pUC ori: pUC origin of replicati東跳on. Plasmids carrying th算雜is origin exist in high copy numbers i玩好n E. coli.

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