斑馬魚基因表達Tol2載體

我們的Tol2載體系統可以非常有效地將(jiāng)外源DNA插入到宿主細胞快票的基因組中。該系統技術簡單，利用質粒說黃轉染或電轉的方法可將(jiāng)您感興趣的基因永久整合到宿爸頻主基因組中。

該系統來源于Tol2轉座子，它最初是從硬骨魚青鳉魚（著公Oryzias latipes）中分離出來的。 基于序列同源通影性分析，發(fā)現Tol2轉座子與整個脊椎動物開日基因組中發(fā)現的非自主元件的hAT家族密切相關。

Tol2系統包含兩(liǎng)個載體，一個載體被(bèi)稱爲輔助質粒，北雜負責編碼轉座酶；另一個載體被(bèi)稱爲轉座子質粒，包含兩(liǎn現離g)個反向(xiàng)末端重複序列（I紅門TRs）以及兩(liǎng)者之間的轉座區域，需要被(bèi)轉座到宿主基花器因組中的目的基因就(jiù)克隆在這(zhè)歌路個區域。

當輔助質粒和轉座子質粒共轉染靶細胞時(shí)，輔助質粒産相草生的轉座酶將(jiāng)會(huì)識别轉座子的兩(liǎng)對日個ITR，然後(hòu)將(jiāng)被(bèi)轉座區和兩(l我綠iǎng)個ITR元件插入到宿主基因組中。開日Tol2轉座子在宿主細胞中的插入位務習點沒(méi)有明顯堿基偏好(hǎo)性，這(zhè)不同于具有特定靶标位點的我筆轉座子系統。如，piggyBac轉座廠門插入通常發(fā)生在包含TTAA序列的宿主染色體位點。

Tol2是II類轉座子，通過(guò)“剪切—粘貼”的機制移動，從一個地方和年轉座到另一個地方，而不留下序列本身（恰好(hǎo)相反，I類轉座子是通過(你慢guò)“複制—粘貼”的方式移動）。Tol2通過(制很guò)“剪切-粘貼”機制以單拷貝進(jìn)行整合，在每一個插入位點都(dō站用u)會(huì)産生一個8 bp的重複序列。

有兩(liǎng)種(zhǒng)途徑見技可將(jiāng)轉座酶導入靶細胞。第一種(zhǒng)是將(jiā腦西ng)輔助質粒瞬時(shí)轉染到細胞中，使轉座酶的瞬時(shí)表達微不。 第二種(zhǒng)是利用輔助質粒體外轉錄出Tol2 mRNA，然後(h多舊òu)注射到靶細胞中。無論哪種(zhǒng)家河情況，轉座酶都(dōu)隻能(néng事匠)短時(shí)間表達。 随著(zhe)輔助質粒的丢失或轉近不座酶mRNA的降解，轉座子會(huì)永久整現玩合到宿主基因組中。如果將(jiāng)Tol2轉座酶重新導入細胞中，整合的轉車鄉座子會(huì)再次通過(guò)“剪切—粘貼”的機制移動。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。