線蟲常規質粒基因表達載體

概述

第一次使用顯微注射法將(jiāng)DNA遞送至線蟲體内的實志商驗發(fā)生在1991年。在這(zhè)個道了實驗中，常規質粒DNA被(bèi)注射到線蟲的懂是遠端性腺。注射後(hòu)的DNA進(jìn)腦微入性腺細胞細胞核中形成(chén兒也g)染色體以外的質粒微陣列，并可以遺傳到下一代內快。該種(zhǒng)技術存在多種(zhǒng)局限：首先，常規質能資粒形成(chéng)的微陣列在多個世代後(hòu)服日其表達水平可能(néng)會(國學huì)不穩定。第二，該方式産生的轉基因動物是嵌合體，意味著匠近(zhe)有一些細胞成(chéng)功轉染了而另一些則沒(m美女éi)有。

關于該載體系統的更多信息，請參照下列文獻。

參考文獻	主題
EMBO J. 10:3959 (19化可91)	DNA transformation in C. 她人elegans
Sci Rep. 9:9192 (2019)	Promoter-proximal introns increase水自s gene expression levels in 問做C. elegans.

亮點

我們的載體經(jīng)過(guò)專門笑舞優化，整合了啓動子近端的内含子序列在載體骨架上，可以在線蟲中高水平表達目的基因通醫。

優勢

技術簡單：向(xiàng)線蟲轉染質粒載體是技術上相對(duì)直接且對(湖廠duì)比病毒載體需要包裝生産而更爲簡單的方式。可以使用電轉染、顯微注好時射或者喂食包含質粒載體的大腸杆菌等方式將(jiāng)質粒導入線蟲體内。章跳

裝載量大：我們的載體可以容納總共約30 kb長科的DNA。該質粒的骨架部分隻占約2.商費25 kb，因此留下了巨大的空間用于插入用戶的目的基因。報讀

高表達水平：合成(chéng)的啓動子近端的内商快含子序列被(bèi)整合至載體骨架，可以帶來很高水平的基因表達。

不足之處

載體DNA無法整合基因組：常規質粒載體主要以遊離體DNA的形式存在于著土細胞中而且通常不整合基因組。如果質粒載體含有抗藥性基因的表達盒，那麼(me冷笑)載體DNA穩定整合細胞基因組可以對(duì)轉染的細胞進(jì線來n)行藥篩。

可轉染的細胞類型有限：使用常規質粒轉染不同的細胞類型的轉染效率差異可能(néng)很中不大。

基因遞送效果的不均一性：盡管高水平表達的轉基因容易實現，但是質粒轉染的均一性可能(néng)較差。有些友路細胞攜帶較多的質粒拷貝，有些則老長攜帶較少的拷貝甚至沒(méi)有。

載體關鍵元件

Promoter: The promoter drivi離又ng your gene of i算影nterest is placed女就 here.

Synthetic intron: This is placed in proximal to prom上算oter to promote gene expression.

Kozak: Kozak consensus sequence.妹話 This is placed in 地唱front of the start codon of the ORF 朋科of interest to facilitate那說 translation initiatio妹相n in eukaryotes.

ORF: The open reading fr請科ame of your gene of interest 影跳is placed here.

3' UTR+polyA: Allows transcription如弟 termination and polyade機離nylation of mRNA transcribed by RNA舊見 polymerase II. It 嗎業functions in so懂鄉matic and germ cells.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene地看. It allows the plasmid to be main也有tained by ampicillin selection in E. 了火coli.

pUC ori: pUC origin of replicat工鐵ion. Plasmids carryi醫來ng this origin exist in high co媽作py numbers in E.窗動 coli.

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