雲舟生物提供全面(miàn)的sh草遠RNA基因敲低解決方案，幫助您獲得高效的RNAi效果。我們提供基于U6啓務新動子驅動的shRNA的和自定義啓動子驅動的miR有坐30 shRNA的兩(liǎng我是)種(zhǒng)shRNA表達方式，根據您的實驗吧議需求可靈活控制shRNA的表達。我們可以對(duì)shRNA載體進(jìn)來要行多種(zhǒng)類型多種(z說哥hǒng)滴度的病毒包裝（如慢病毒、AAV、腺病毒），以體南幫助您將(jiāng)shRNA遞送至難以轉染的細胞中。我們白上還(hái)可以專門爲哺乳動物細胞中的大規模基因腦都功能(néng)喪失篩選構建shRNA文庫。此外，我們的線載體設計平台與shR內少NA 數據庫涵蓋了多種(zhǒng)物種(zhǒn厭員g)，讓您輕松找到合适的shRNA西窗打靶您的目的基因。
亮點
定制shRNA載體
使用我們高度直觀的線上載體設計平台，你可以選擇超過(guò)30關喝種(zhǒng)包括病毒類型與非病毒的shRNA載體這錢骨架，并且可以自由組合啓動子、報告基因、藥篩标記等載體元件。我們間術的shRNA數據庫可幫助您方便地選擇打靶目的基因謝廠的shRNA，同時(shí)無需您自行設計序列。我們還(h錢腦ái)同時(shí)提供shR間吃NA打靶效率檢測載體，以讓您可以測試您的shRNA的幹擾效率。 對(duì)于著放我們的shRNA載體，您均可購買額外的下遊服務，如質粒車村DNA制備和病毒包裝服務。
除去以上的列表中的載體系統，我們還(hái)可以提供Cre-lox條件表達分如shRNA載體。請發(fā)送設計咨詢給我們。
常用shRNA載體
雲舟生物提供一系列常用shRNA載體，可表達scramble shRNA或照短內載體上的常見基因的shRNA。在將(jiāng)這(zhè)些載體加入河離購物車之後(hòu)，您還(hái)可以購買質粒DNA提取和病毒包裝等下遊服南河務。 您可以使用下方的載體工具欄訂購您的U6 s工站hRNA載體。
如果您需要訂購miR30 shRNA載體，請向(xiàng)如市我們發(fā)送設計咨詢
shRNA病毒包裝
我們提供多種(zhǒng)規格的河現的優質的慢病毒、AAV 和腺病毒包裝服務，可以將(jiāng)shRN房船A遞送隻難轉染的細胞中。我們擁有專有的技術和試劑，大大改進媽哥(jìn)了病毒包裝的滴度、純度、活性和一緻性，還(hái)可以針對(d吃劇uì)病毒包裝時(shí)的所使用的病毒載體進可理(jìn)行優化。
shRNA（3+1）套裝
需要注意的是，并非所有經(jīng)驗設計的shRNA均業頻會(huì)有良好(hǎo)的幹擾效果。s聽木hRNA的幹擾效果取決于多個因素，包括shRNA的長都生(cháng)度、莖環結構、GC含量、shRNA的熱力聽通學(xué)穩定性、靶序列的二級結構、對(duì)于其它基因的脫靶作姐效應等。一般來說(shuō)，約50%~70·%的shRNA信制具有可見的幹擾效果，而其中的20-3看風0%具有強的幹擾效果。因此，選擇多個shRNA用于打靶有助于發(f女年ā)現敲低效率最高的shRNA。
雲舟生物提供的shRNA（3+1）還房套裝包含3個針對(duì)你的目的基因的定制shRNA載體、3個笑筆對(duì)應的定制shRNA病毒，以及一個可用于測試多個shRNA的高性價如拍比的scramble對(duì)照病毒。我計男們目前提供慢病毒、AAV以及腺病毒的shRN為跳A（3+1）套裝。
您可以使用下方的工具欄訂購shRNA（3+1光就）套裝。
請注意該工具欄隻适用于設計U6 shRNA載體。如果您需要設計miR30-sh子事RNA或IPTG誘導表達的shRNA載體，或者無法找到您的打靶基因，請發(fā化不)送設計咨詢給我們。
如果您僅需要構建3個shRNA質粒載體，我們亦提供shRN學喝A載體3件裝套裝，詳情如下。
| 服務名稱 | 價格（CNY） | 周期 | |
| shRNA慢病毒載體（3件裝）構建 | ￥1,980 | 4-7天 | 訂購咨詢 |
| shRNA腺相關病毒載體（3件裝）構建 | ￥1,980 | ||
| shRNA腺病毒載體（3件裝）構建 | ￥3,880 | 6-12天 |
shRNA文庫
shRNA文庫在研究疾病通路、藥物治療中的細胞反應、發(fā)育那劇過(guò)程、基因調控方面(mià商視n)，是進(jìn)行大規模基因功能車花(néng)喪失篩選的強大且高性價比的科城工具。根據您的需要，我們可以把構建的文庫轉化大腸杆菌，也可以以D南年NA或病毒的形式給您發(fā)貨。我們定制的文庫都(dōu)會(huì)進(j民好ìn)行NGS測序驗證以确定文庫的路哥質量。
我們提供高質量的針對(duì)人和小鼠基因的shRNA道錯慢病毒文庫産品。對(duì)于每個物種(zhǒng)，我們訊離提供了兩(liǎng)種(zhǒng明問)規格的慢病毒shRNA文庫産品：全基因組大這都庫（針對(duì)約19,000個Re放看fSeq基因）和精華基因小庫（針對(duì)PubMed Cen頻作tral上約2,000個最常被(bèi)引用的基因），每個基因對(duì)熱些應5-6個不同的shRNA。我們的shRNA文庫已通過(guò)了N通筆GS測序和功能(néng)驗證。
預制shRNA文庫的亮點
| 産品名稱 | 基因數量（個） | shRNA數量（條） | 規格* | 貨号 | 價格（CNY） | |
| 人類精華基因shRNA文庫 | 2,161 | 12,471 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1037bj商麗k) | ￥13,980 | |
| 小鼠精華基因shRNA文庫 | 2,233 | 12,472 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1039sgb) | ￥13,980 | |
| 人類全基因組shRNA文庫 | 18,432 | 92,917 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1038n下綠gq) | ￥13,980 | |
| 大規格 (>1.0x108 TU/ml, 5 ml) | LV5M(Lib190505-1038ngq) | ￥17,480 | ||||
| 小鼠全基因組shRNA文庫 | 19,790 | 92,917 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1042tfx) | ￥13,980 | |
| 大規格 (>1.0x108 TU/ml, 5 ml) | LV5M(Lib190505-1042tfx) | ￥17,480 | ||||
* 對(duì)于精華基因文庫，标準規格包裝的慢病毒南歌可以滿足>40次篩選的要求，且達媽哥到100x的覆蓋率。對(duì)于女高全基因組文庫，标準規格包裝的慢病毒可以滿足>5次篩選的要求，且理地達到100x的覆蓋率；大規格包湖火裝的慢病毒可以滿足>25次篩選的要求，且達到100x的覆蓋率。
shRNA基因敲低細胞穩轉株
雲舟可爲您提供長(cháng)期敲低目的基因的需求定制構建shRNA敲低費我細胞穩轉株。我們基于shRNA分值測試又多三個候選的shRNA，然後(hòu)將(jiāng)最佳敲低效率的一個通月通過(guò)慢病毒轉導生産細胞穩轉株。我們通過(g姐妹uò)RT-PCR驗證細胞中的業雪基因敲低水平。此外，我們還(hái)會(huì)進(jìn)行一系列标準的Q年技C檢測，如無菌檢測、支原體檢測，然後(hòu)才會(他麗huì)放行最終的細胞産品。
| 細胞模型 | 構建方式 | 交付内容 | 價格 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| shRNA基因敲低穩轉株構建 | 慢病毒轉導 | 多克隆細胞群 | ￥18,980.00起(qǐ) | 8-13周 |
| 單克隆細胞株 | ￥23,980.00起(qǐ) | 13-18周 |
短發(fā)夾RNA（Short hairpin RNA，shRNA）是具有友為莖環結構的RNA分子，可用于通過(guò)互補堿朋窗基配對(duì)靶向(xiàng)mRNA序列并促使其降解，因此廣泛看日用于各種(zhǒng)RNAi應用。通常可以使用雙鏈DNA載體以病毒和非病毒理制形式將(jiāng)shRNA引入靶細胞。來西當用shRNA載體轉染或轉導細胞時(商什shí)，shRNA在細胞核中轉錄形成(c離照héng)發(fā)夾結構。shRNA發(fā)夾結構包含一個莖環，一條RN公我A反義鏈和與其互補的正義鏈。轉錄形成(chéng)的shRN日鄉A離開(kāi)細胞核，在細胞質中經(jīng)過(guò)D妹這icer加工，然後(hòu)加載到RNA誘導的沉默複合體（RNA也他-induced silencing complex，RISC）複合時農體上，随後(hòu)目标mRNA被(bèi)識别并降紙請解（圖1）。
圖1 U6 shRNA和miR-shRNA腦生介導的基因敲低
shRNA相對(duì)于siRNA具有顯著的在基因敲低效率上的有時愛化(shí)，因此成(chéng)爲流呢化行的RNAi方式。下表總結了兩(liǎng)者的具體的特點：
| shRNA基因敲低 | siRNA基因敲低 | |
|---|---|---|
| 遞送方法 | 根據載體類型進(jìn)行轉染或者轉導 | 轉染 |
| 敲低時(shí)長(cháng國制) | 長(cháng)期 | 瞬時(shí) |
| 遊離體抑或穩定整合 | 根據不同的遞送方式，可具有遊離體或者穩定請很整合的形式 | 遊離體 |
| 添加篩選标記 | 可添加熒光或者藥物篩選标記 | 否 |
| 适用細胞類型 | 适用于相當廣泛的細胞類型 | 隻适合易轉染細胞 |
| 脫靶效應 | 低 | 高 |
| 自身降解速度 | 低 | 高 |
控制shRNA表達
有兩(liǎng)種(zhǒng)常用方法來控制載體上的紙書shRNA表達：基于U6啓動子的shRNA 表達和基于miR的shRN遠們A表達。雖然基于U6的shRNA載體使生音用 RNA聚合酶III啓動子驅動簡單莖環 shRNA聽上 的表達，基于miR的shRNA 載體則使舊著用RNA聚合酶II啓動子表達适配mi議制croRNA支架的 shRNA嗎內。這(zhè)兩(liǎng)種(zhǒng)風師shRNA在細胞質内通過(guò)相似的機制被(bèi)加工，最後(hòu購草)導緻靶基因沉默。然而，在細胞核内轉錄後(hòu)，基于miR的秒窗shRNA與基于U6的shRNA不同，由答劇于其結構内存在miR内源序列，其加工方式麗知更像初級miRNA（圖1）。
miR shRNA載體中的RNA聚合酶II啓動子樹線包含了組織特異性、可誘導的或可變強度等啓動電近子等類型，從而使其可應用于組成(chén照亮g)型U6啓動子無法應用的各種校東(zhǒng)實驗場景。相對(duì)于其它的土喝基因敲低載體系統，RNA聚合酶II啓動子在基于miRNA的shRNA系低子統中可有效轉錄長(cháng)轉錄本，我報因此該系統具有幾個額外優勢。比如說(shuō)，可以多個shRNAmiR可以說輛轉錄爲單個多順反子，且在細胞内可加工形成(chéng)東校成(chéng)熟的shRNA。這(zh什國è)允許使用單個轉錄本敲低多個基站做因或靶向(xiàng)同一基因的多個黑話區域。因此，該載體可用于表達單個或多個shRNAmiR。其次，在該載體外快系統中，用戶選擇的蛋白質編碼基因可以放在shRNAmiRs的多順離她反子中。此ORF的表達可用于直接監測shRNA國光轉錄（如果使用标記基因ORF）或用于需要ORF和shRNA共表達的其他信姐情景。
雖然miR shRNA載體在控制s海小hRNA表達上更爲靈活，我們發(fā)現U6 s分子hRNA載體相對(duì)miR shRNA載體的敲子姐低效果的魯棒性更佳。因此除非必須使用miR shRNA載體，通過(作拍guò)我們會(huì)推薦首機風先使用U6 shRNA載體用于RNAi實驗。
下表比較了U6 shRNA載體與mi懂相R shRNA載體的特點：
| U6 shRNA載體 | miR shRNA載體 | |
|---|---|---|
| shRNA結構 | 簡單的莖環shRNA | shRNA 适配一個microRNA 骨架 |
| shRNA長(cháng)度 | 50-70 nt | >250 nt |
| 啓動子 | RNA聚合酶III啓動子，如 U6和H1 | RNA聚合酶II啓動子，如廣泛性啓動子和組織特異性啓動子 |
| shRNA加工機制 | 隻在細胞質中經(jīng)過(guò)Dicer加工 | 在細胞核内經(jīng)過(guò)Drosha加工，在細胞質中通鐵坐過(guò)Dicer加工 |
| 一個載體上可表達的shRNA數量 | 通常爲單shRNA | 單個或多個shRNA |
| 是否可以在shRNA轉錄本上表達其它ORF計雪 | 否 | 是 |
| 基因敲低效率 | 魯棒性較高 | 魯棒性較低 |
| 毒性 | 高細胞毒性 | 較低的細胞毒性 |
試驗驗證
我們的U6 shRNA慢病毒載體經(jīng)過(guò)基因敲低效率驗證，結友朋果如下圖所示。結果展現了U6 sh厭工RNA與miR30 shRNA之間的敲低效率比較。
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圖2 U6 shRNA慢病毒載體與miR30 shR到農NA慢病毒載體對(duì)EGFP的敲低效率比較。(A)U6啓動子驅動的章數shRNA表達的慢病毒載體與miR30 shRNA（4條shRNA）慢病毒玩如載體分别包裝成(chéng)慢病毒，然後(hòu)轉導穩定表達EGF銀區P的HEK293T細胞。藥篩前後(hòu)流式細胞術檢測EGF員聽P表達情況。（B）藥篩前，EGFP表達在U6 對雜shRNA的作用下減少了46%（P<0.001）,在CMV啓動子西月驅動表達的miR30 shRNA資光（單shRNA）作用下減少了13%（花話P<0.001），在CMV啓動子驅動表達的m鐵小iR30 shRNA（4條shRNA）作用下減少了44%（P<0.長飛001）。（C）EGFP表達在U國時6 shRNA的作用下減少了72%（P&他拍lt;0.001）,在CMV啓動子驅動表達是算的miR30 shRNA（單shRNA）海見作用下減少了60%（P<0.001算地），在CMV啓動子驅動表達的miR30 shRNA（4條shRNA）作遠問用下減少了67%（P<0.草街001）。EGFP的相對(duì跳電)表達量通過(guò)轉導與未轉導細胞的熒光強度中值（Media黃事n fluorescence intensities，MFI能報）的比值計算。三次重複實驗，圖中顯示SD車這值，p值根據Tukey檢驗計算。
shRNA數據庫
雲舟生物的在線shRNA載體設計工具專門爲多個從議物種(zhǒng)的shRNA設計進(jìn)行了優化，劇亮可幫助您針對(duì)靶基因設計出高幹擾效率的shRNA序列。我們設計和評公都估shRNA的規則與RNAi consor雨城tium（TRC）使用的規則類似。所有的幹擾分值均房可≥0，平均數約爲5，标準差約爲5，95場工%的分值均≤15。若一個shRNA煙愛的幹擾分值是15，則表示具有很高幹擾效率且易于克隆；那慢若幹擾分值爲0，則表示幹擾效果較差或難以克隆。
當您在我們的在線平台上設計shRN靜的A載體時(shí)，您可以選擇在我們的數據庫中作費搜索您的目的基因。輸入您的基因名稱後(hòu)，您將(jiā空話ng)在我們的數據庫中看到針對(duì)您的目的基因的所但草有shRNA的詳細信息，包括指向(xiàng)UCSC數據庫的鏈接票山，從而可查看其基因組序列和所有轉錄本。我們的數據庫按照針對(duì)土朋目的基因的shRNA的幹擾分值對(duì)shRNA進(j藍光ìn)行排序，并推舉出三個幹擾分值最高的shRNA。請注意幹擾分值隻是一個參服東考值。實際的幹擾效果可能(néng)會(huì)與預測的分值有偏差，文訊低分值的shRNA也可能(néng)産生較好(hǎo)的幹擾效果。同時(sh拍快í)，靶向(xiàng)轉錄本的 3’ UTR也可以起(qǐ)到幹擾作用請藍。 我們的網站包含豐富的學(xué)習資料，可幫助您安排并實施您的RNAi實慢從驗。
參考文獻
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Nucleic Acids Res. 34習術:e53 (2006); Development of miR155-ba湖資sed shRNA vectors.
J Gene Med. 9:620 (2007); Development of IPTG-inducible gene k也短nockdown system林還.
Proc Natl Acad Sci USA. 101:103訊雨80 (2004);Development of Cre-lox-reg時服ulated gene knockdown system.
暫無
無論是shRNA介導的基因敲低抑或器問是gRNA介導的基因敲除（如CRISPR或TALEN）都也嗎(dōu)可能(néng)是研放舞究基因功能(néng)喪失的富有地對價值的實驗方法。爲了确定哪種(zhǒng)方法最适合您的件在實驗應用，以下是您應該考慮的一些事(shì)項。月白
基因敲低載體
基因敲低載體表達shRNA抑制靶基因的mRNA，通過(guò)引發(f房學ā)mRNA的切割抑制翻譯過(guò)程。shRNA敲低不改了舞變靶基因的DNA序列。
基因敲除載體
CRISPR和TALEN都(dōu)是通過(guò關放)指導核酸酶切割基因組中的特定靶位點來發(fā)揮到算作用。然後(hòu)這(zhè)些切割位點被(bèi)細胞低效地修複，從自很而導緻修複部位的永久性突變，比如産生基因的小片段插入或堿基缺失。這(z去月hè)類突變的一部分會(huì)導緻基因懂唱的閱讀框移碼、出現提前終止密碼子等，最終導緻目的基因的功能(né紅門ng)喪失。如果同時(shí)靶向(xiàng)哥車基因組中兩(liǎng)個相鄰緊密的切割位點（距離幾個k說鐵b），也可以導緻其間區域的删除。
shRNA敲低永遠不會(huì)完全抑制靶基因的表達。即使對(duì)于最街來有效的shRNA，靶基因的一些殘留表達也會(hu做能ì)保留。相比之下，在一小部分經(jīng)過(guò)處理的細胞群中，CRI去國SPR和TALEN可以産生永久性突變，這(zhè)可能(néng)導緻基見那因功能(néng)完全喪失。
shRNA載體通常在轉染/轉導的細胞時(shí)獲得較好(hǎo)的均一視白性，實驗之間的一緻性也較佳。相比之下，由于引入突變月上是随機的，CRISPR和TALEN的基因編輯效果在細胞之間的差異相跳新當大。爲了完全敲除細胞中的目的基因，必須敲除細胞中基因的所有拷貝答動。鑒于正常細胞具有任何基因的兩(liǎng)個拷貝（X或Y連鎖基因除外唱地），而癌細胞可以具有兩(liǎng)個以上的拷貝，這慢也(zhè)種(zhǒng)完全敲除的細胞可生筆能(néng)隻占所有處理後(hòu)的細胞的音票一小部分。出于這(zhè)個原因，核酸酶介導的敲除科下實驗需要通過(guò)測序來篩選克隆，以确定所有目些懂的基因拷貝都(dōu)被(bèi鐘科)敲除的子細胞群。
已有報道(dào)表明shRNA介導的術地基因敲低和核酸酶介導的基因敲除均會(h玩線uì)産生脫靶效應。脫靶效應的表征可以通過(guò)使用多個呢刀不同的shRNA 靶向(xiàng)同一基因來評估。要街如果一個基因被(bèi)在多個不嗎司同的shRNA作用下仍然表現出一緻的表征，則門問這(zhè)種(zhǒng)表征通常則不是脫靶效應一們帶來的。對(duì)于CRISPR或TA媽吧LEN基因敲除，應分析含有功能(néng)喪失突變的雪跳多個克隆，以包含可能(néng)由睡金脫靶突變引起(qǐ)的任何表征。此外，可以對(duì)克隆進(jìn)行脫物音靶位點測序，通過(guò)生物信息學(xué)方法鑒定以查看它們是否已發(黃友fā)生突變。
并不是所有的shRNA都(dōu)會(huì)起(qǐ)作用
根據我們的經(jīng)驗和來自客戶的反饋草行，使用3-4個shRNA進(jìn)行幹擾測試時(shí)，通常隻有2-3低綠個有比較合理的幹擾效果。所以，在使用shRNA時(shí公現)，重要的是要認識到并非所有的shRNA都(dōu)能(路草néng)正常工作。通常情況下，約50-70％的shRNA具有幹擾效刀化果，其中隻有約20-30％的shR村秒NA具有比較明顯的效果。如果您使用幾問老個shRNA靶向(xiàng)同一個基因都(dōu)沒(méi)有一個能(美雪néng)産生滿意的幹擾效果，最好(hǎo)的解決方式是嘗試更多的sh相件RNA，特别是那些經(jīng)過(guò)文獻驗證的s土我hRNA。目前，許多研究人員使用靶向(xiàng)相同基因的shRN舊愛A庫（即不同shRNA的混合物）進(jìn)行實驗，以期提化明高幹擾效率。
幹擾效率檢測方法不當
最常用評估shRNA幹擾效率的靈敏測定方工用法是RT-qPCR，您可能(nén子冷g)需要嘗試幾對(duì)引物，篩選出最具特異和算性和效率的引物對(duì)。通常情況下，RT-qPCR引物應跨越内問低含子，即設計在兩(liǎng)個外顯子上短很，以免擴增基因組DNA。當使用新引物時(shí)，建議您先進(jìn)行預擴增生事實驗，并將(jiāng)PCR産物進(jìn)行電坐長泳檢測目的條帶，或者甚至可以通過(guò)測序驗證PCR産物是地白否正确。在進(jìn)行RT-qPCR的同時(shí)北國，應注意設置minus-RT對(duì)照以評估基因組DNA的污染水平。您不現可以使用NCBI引物設計工具（http相有s://www.ncbi.nlm.nih.gov/too通生ls/primer-blast/）來男刀檢查引物質量。 幹擾效率也可以通過(guò)蛋白質印迹法（Western b多員lot）進(jìn)行評估。然而，該方法常産生來自非特異性抗體結合的假陽性錯討條帶，從而導緻誤判沒(méi)有幹擾效果。因此，坐唱在使用時(shí)需要确保抗體的特異性。 您使用的shRNA可能(néng子鄉)隻打靶基因的某個轉錄本 在設計shRNA時(雜吧shí)，我們推薦您使用那些能(néng)靶向亮刀(xiàng)單個基因多個轉錄本的s來志hRNA，除非您隻想打靶特定轉錄本。VectorBuilder提供針對區工(duì)常見物種(zhǒng)的亮知shRNA數據庫。當您將(jiāng)shRNA元件插入載體時(sh畫輛í)，您可以選擇shRNA數據庫，通過(guò多的)搜索目的基因查看所有可用的shRNA詳細信息。您還呢信(hái)可以打開(kāi)其中的UCSC鏈接，查看shRNA序列在基因組和轉公兵錄本中位置等信息。
您使用的shRNA可能(néng)兵飛隻打靶基因的某個轉錄本
在設計shRNA時(shí)，我們推薦您使用那些能(néng)靶向(xiàn作兒g)單個基因多個轉錄本的shRNA，銀小除非您隻想打靶特定轉錄本。VectorBuilder提供針對(d內自uì)常見物種(zhǒng)的shRNA數據庫。當您將(jiāng)shR東醫NA元件插入載體時(shí)，您可以選擇shRNA司服數據庫，通過(guò)搜索目的基因查看所有可用問劇的shRNA詳細信息。您還(hái)可以打開上輛(kāi)其中的UCSC鏈接，查看sh水大RNA序列在基因組和轉錄本中位置等信息。
我們設計和評估shRNA的規則與RNAi consortium（TR船朋C）使用的規則類似。對(duì)于每個RefSeq轉錄在坐本，我們會(huì)搜索出所有的21 mers作爲短月候選靶位點。以下因素會(huì)降低幹擾效率/特異性或影響克隆，含從金有這(zhè)些特點的序列將(jiāng)會(huì)短的被(bèi)排除。主要因素包括：含有≥4個連續相同堿基，含有≥7個G或暗藍C，GC含量<25％或> 60％以關匠及序列的5'端含有AA堿基。如果靶點内部含有莖環結構，或是3'末端的GC含量較空錢高，或是該靶點是已知的miRNA核心序列或是會(hu見請ì)打靶到其他基因，則該靶點的分值就(jiù)會(h海技uì)較低。若靶位點存在于一個基因的多個轉錄本，則該靶點的分值就(jiù)會門他(huì)較高。 所有的幹擾分值均≥0，平均數約爲5，标準差約爲5，95船媽%的分值均≤15。若一個shRNA的幹擾分值是15，則表示商工具有很高幹擾效率且易于克隆；若幹擾分白內值爲0，則表示幹擾效果較差或難以克隆。
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