畢赤酵母蛋白表達載體

概述

我們的畢赤酵母重組蛋白表達載體系統有著(zhe)非常強大高效身兵的重組蛋白表達能(néng)力。畢紙林赤酵母作爲一種(zhǒng)甲基營養哥一型酵母，被(bèi)廣泛應用在蛋白産品的研裡光究和工業應用上。

在該載體系統中，目的基因通常被(bèi)克隆在甘油醛-3-磷酸脫氫酶啓動美市子（GAP）和乙醇氧化酶1啓動子（AOX1）的下遊，這(zh是南è)取決于基因的基本結構和表達誘導條件的要求。GAP是一個強大的組但不成(chéng)型啓動子，而AOX1則是受甲醇嚴格制志高效調控的啓動子，這(zhè)兩(liǎng)志錯個啓動子都(dōu)能(néng)夠介導目的基因的高水平表達，目的蛋白的累加總民空量往往可達總細胞可溶性蛋白的30%以上。一般來說(shuō)，GAP啓動這睡子的表達能(néng)力略強于誘導狀內算态下的AOX1啓動子。我們建議您做一個時(shí)間曲線測試醫業，以确定表達目的蛋白的最佳啓動子類型。

與釀酒酵母不同的是，畢赤酵母以甲醇爲基礎碳源，能(néng)更高水平地介爸南導重組蛋白的表達（通常是釀酒酵母的的10-100問鄉倍）。另外，畢赤酵母和釀酒酵母在技術上有許多共通之處（如互補作小東用），通用的基因注釋和遺傳命名法簡化了兩(liǎng)個物種(zhǒng東鄉)的研究。

關于該載體系統的更多信息，請參考以下文獻。

參考文獻	主題
Gene. 186:37 (1997)	Description of G火民AP promoter
Mol Cell Biol. 5:1111 (1985) Yeast. 5:167 (1989)	Description of AOX1 promoter

亮點

該載體系統用于在畢赤酵母中組成(chéng)型或誘導型表達重組蛋慢河白，目的基因被(bèi)克隆在組紙作成(chéng)型啓動子GAP或甲醇誘導是好型啓動子AOX1的下遊。

優勢

高表達：GAP和AOX1都(dōu)能(néng)介導目的基因的高水平歌也表達。

嚴格控制表達：在無甲醇的情況下，AOX1啓動子無見海法介導目的基因的表達；有甲醇的存在下，目的基因被(bèi)強烈我做激活表達。

不足之處

潛在的洩漏表達：GAP是組成(chéng)型啓動子，表達水平不會(huì票就)受到調控；其次，雖然AOX1啓動子在缺乏甲醇的條件下會(huì)自師被(bèi)抑制，但少數情況下目的基因也會(huì)發(fā)生洩漏表達黃綠。

載體關鍵元件

Promoter: Drives high-level transcription of 多近the gene of interest.

Kozak: Kozak consensus間照 sequence. It is place外綠d in front of the們紅 start codon of the ORF of interest be得鐘cause it is believed to fa美我cilitate translation initiat匠女ion in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your ge知快ne of interest i車我s placed here.

AOX1 TT: The transcription termi體短nator from P. pas風信toris alcohol oxidase 1. This fac飛頻ilitates transcri鐵刀ptional termination and poly物跳adenylation of mRNA in ye不見ast.

Zeocin: Zeocin resistance gene. I了厭t allows the plasmid to 低要be maintained by鄉章 Zeocin selection in E. coli and yeast.書資

pUC ori: pUC origin of replicatio唱錢n. Plasmids carry工習ing this origin exist 歌錢in high copy numb亮雪ers in E. coli.

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