哺乳動物增強子檢測載體（體内）

概述

該載體系統設計用于在小鼠模型中，高效分析哺吧計乳動物增強子。通常情況下，將(jiāng)感興趣的增強子克隆作新到該載體中，并將(jiāng)構建好(hǎo)的載體用于白數制備轉基因小鼠。對(duì)轉基因胚又動胎或成(chéng)年小鼠中LacZ報告基因的表達情況進(jìn員員)行檢測，可以進(jìn)一步分析增強子的活土章性。

該載體系統可用于篩選增強子元件，分析些讀增強子的組織特異性，比較不同增強子的活性，譜地報系追蹤以及其他應用。

關于該載體系統的更多信息，請參麗店考一下文獻。

參考文獻	主題
Nature. 444:499-502 (2006)	Use of the vector s靜秒ystemtocarry out genome-wide testing 們為of putative enhancers是河 in the mouse
Development. 105:707-714 (業會1989)	Cloning of the H又鐵sp68 minimal promoter

亮點

我們的載體系統是基于常規質粒基因表達載體而構建的。待測增強子位于Hsp6小身8最小啓動子（Hsp68_mini）的上遊，可控制會風下遊LacZ報道(dào)基因的表達。有活性的增強子會(hu話行ì)促進(jìn)最小啓動子增強LacZ基因的表達；在缺乏活性增強子的情況下影農，Hsp68_mini具有非常弱的本底表達能(néng)力，會(huì)使L書不acZ基因弱表達或不表達。在胚胎或組織切片中，通過(gu女冷ò)X-gal與LacZ的顯色作用可以高度靈敏地原還費位檢測增強子活性。

優勢

易于制備轉基因動物：通過(guò)常規原核注射，可以很房和容易地高效制備轉基因胚胎或活體小鼠。

簡單而靈敏：使用LacZ作爲報告基因，X-gal染色會(huì)産生明顯的藍色，即使在低年離表達水平下也可以輕松檢測到，因此可以非常靈敏地判斷增強書大子活性。

不足之處

随機整合：當通過(guò)原核注射將(jiāng)載體用于制備轉基因小鼠時(sh雜道í)，載體會(huì)以一個或多個拷貝的方式随機整合到宿又上主基因組中。整合位點相鄰的基因組序列以及拷貝數和整合片段的不體路确定性，會(huì)影響報告基因的表達水平和特異性。爲了克服這(zh黑章è)一點，對(duì)于給定的載體通常需要制備多個轉基因品系們的，以便鑒定多個品系的LacZ表達情況，進(jìn)而确定增強知海子的真實活性。

載體關鍵元件

Enhancer: Your enhancer of interest is placed 照是here.

Hsp68 minimal promot那媽er: The minimal promoter sequence頻土 from mouse Hsp68 (heat shock pro我國tein 68kDa). This will 電文drive transcription of the reporter if 上對an enhancer element is present to 外唱activate it. In the absence 劇視of such enhancer activity, the minimal黃錯 promoter will be almo煙為st completely inactive.

LacZ: The beta-galactosidase reporter gene. 子媽The encoded enzyme converts 的到the colorless an事北d soluble X-gal to an i農睡ntensely blue insoluble還路 product that stains the cells in高海 which LacZ is 遠綠expressed.

SV40 early pA: Simian virus 40 early polyadenylati生電on signal. It facilitates tr短資anscriptional terminat通自ion of the upstream ORF.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allo他水ws the plasmid to be maintained 銀那by ampicillin selection in E. col票討i.

pUC ori: pUC origin of replicat愛謝ion. Plasmids carr新木ying this origin exist in下公 high copy numbers in E書大. coli.

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