BAC修飾

通過(guò)BAC修飾（BAC modificatio懂做n/recombineering），我們可以將(書可jiāng)報告基因放置在BAC特定的調玩制控序列之後(hòu)，也可以將(jiāng)點突變引入目的基服綠因、或是將(jiāng)BAC上的片段轉移到質粒載體化是上以及在BAC骨架上添加篩選标記等。林師

以下是可供選擇的服務類型，按照操作步驟定義的價格和周期請點擊了解更多>>

備注:

如何獲取BAC修飾服務？

您隻需點擊主頁上的“發(fā)送設計咨詢”按鈕，就(jiù)可以在線提交您的BAC修飾服務需求。您可以這化業(zhè)樣(yàng)描述您的需求：“我想在這(zhè冷也)個基因的啓動子之後(hòu)放置一個lacZ報告基因”。我們經(jīn光資g)驗豐富的技術人員將(jiāng)免費爲您設計一個可行的方案，并技姐向(xiàng)您發(fā)送包含方案、報價和周期放窗等相關信息的鏈接。如果您對(duì)該方案滿意，可吃黑直接將(jiāng)其添加到購物車中，并根據說(shuō)明下術動單。

服務說(shuō)明

免費設計BAC修飾方案

VectorBuilder經(jīng)驗豐富的技術團隊將(市照jiāng)根據您的需求，免費爲您設計一個詳盡而高效的BAC人下修飾方案。

爲您購買BAC

如果您知道(dào)您需要的BAC的ID睡睡号，請提供給我們，我們將(jiāng)爲您購買。如果對(duì)使用的BA的厭C有疑惑，我們也可以根據您研究的基因爲您找到合适的學湖BAC。絕大多數BAC可從CHORI 的BACPAC資源中心獲取嗎下，但某些BAC需要從其他供應商購買。您也可以直接給我們寄送含有BAC的大腸能土杆菌。

“一步法BAC修飾”

既可用于引入大片段如在某個基因的啓動子後(hòu)面(miàn)加上用于示蹤的在靜報告基因（圖1），也可引入小改變，如點突變（圖2）。

大片段的引入（圖1）：片段包含有目事哥的基因（GOI）（例如LacZ或GFP報告基因）、兩(liǎng呢船)側爲FRT位點的藥物篩選表達框，其兩(雜我liǎng)端具有與重組區域同源的同源臂。通過分相(guò)同源重組來替代BAC上的内源區域，藥物篩選表達拍雨盒可用于鑒定成(chéng)功修飾的BAC克隆，可通過自媽(guò)Flp介導的重組删除該表達盒，隻留下一個FRT位點。

圖1. “一步法BAC修飾”示意圖：在啓動子男科後(hòu)面(miàn)引入目的基因（GOI）(如LacZ或GFP報告基因市哥)

引入點突變（圖2）：片段包含突變區域雜舊、兩(liǎng)側爲FRT位點的藥物去業篩選表達框，其兩(liǎng)端具有與重組區域同源的同源臂。通過(guò)鐵用同源重組取代BAC上的内源區域，最後(hòu)通過(guò)Flp介導的重組删美現除該表達盒，隻留下一個FRT位點。FRT位點被(b習相èi)認爲是“瘢痕”序列，因爲修飾內嗎後(hòu)的BAC除了所需的點突變之外，還(hái)攜帶這(zh自少è)個殘留的FRT。爲了不影響新船基因功能(néng)，該瘢痕序列要放置在基因的非功拍體能(néng)區域，如内含子或UTR區。

圖2. “一步法BAC修飾”示意圖：在基因的第一能森外顯子中引入點突變并將(jiāng)FRT序列放置但很在下遊内含子中

“兩(liǎng)步法BAC修飾”

“兩(liǎng)步法BAC修飾”用于將(jiāng照吃)微小的變化（如點突變）引入BAC，而不留下FRT瘢痕序列（圖跳我3）。該方法适用于以下情況，即在預期突變位點的議兵附近，沒(méi)有合适的空間放置殘留的FRT瘢痕序列。例如，如果要業輛修飾的基因是非常大的單外顯子基因，如也并且所需的突變位點位于基因的中間，則在點突變附近沒開工(méi)有合适的位置來放置瘢痕序列。在這(zh議但è)種(zhǒng)情況下，應該使用兩(liǎng)步法，該方法海筆利用表達藥物篩選标記的基因片段進(jìn)行陽性和陰性篩選（圖3）。第一裡村步，使用該基因片段進(jìn)行同源重組來替代内源靶區域，通過理員(guò)藥物陽性篩選獲得成(chéng)功間頻重組的BAC；第二步，通過(gu靜人ò)同源重組，使用包含突變位點的片段替代藥物篩選基因片段，利章湖用陰性選擇篩出實現點突變的BAC。

圖3. “兩(liǎng)步法BAC修飾”示意圖：在大的單個外知不顯子基因中引入點突變而不留下瘢痕序列

將(jiāng)篩選标記添加到BAC骨架上

使用該類BAC轉染到細胞時(shí)，BAC骨架上的篩選标記將(j舞兵iāng)有利于其在細胞中被(bèi)篩選或示報費蹤，這(zhè)將(jiāng)有利時街于通過(guò)藥物篩選分離含有穩定整合和算BAC的細胞。

將(jiāng)BAC上的片段轉移到質粒載體上

我們可以將(jiāng)BAC的任何區域（可達60 kb）轉移到睡會質粒載體上單獨進(jìn)行研究。例如，如果利用整個BA低南C構建轉基因小鼠以研究在BAC上某個基因的功能(né影制ng)，同一BAC上的其他基因可能(néng)會(huì)對(duì黑費)研究結果有影響，而將(jiāng)目的基因單獨分離到質這西粒上并使用該質粒構建轉基因小鼠可以避免這(zhè)個懂好問題。另外，在技術層面(miàn)件有，使用質粒比使用BAC更加簡單。

BAC修飾的鑒定

BAC修飾區域將(jiāng)通過(guò)老聽測序鑒定。由于重複序列的存在，BAC可他個能(néng)會(huì)發(fā)生片段缺失。爲了降低這(zhè)種但雨(zhǒng)可能(néng)性，我們將(jiāng)重新轉化我做修飾後(hòu)的BAC，并挑選獲得單克隆，通過(guò)在整個BAC白那上進(jìn)行多個位點的PCR擴要短增來确認其沒(méi)有發(fā)生大片段缺失。

價格和周期

該服務的最終交付形式是含有經(jīng)藍雪修飾和驗證的BAC的大腸杆菌。由于該服務涉長一及的工作量大，所以成(chéng)本相對少暗(duì)較高，但外包給我們比自己做更討化實惠。由于方案複雜和易出錯的性質，大多數人親自做生少可能(néng)需要花費長(cháng)達一年的時(shí)間，可能(néng樂討)需要經(jīng)過(guò)不斷的數鄉試劑采購、學(xué)習和查找問題才能(néng)成(chéng)功。爲就學了讓您更好(hǎo)地分配和節省時(shí)著人間，請把繁瑣的工作交給我們。

BAC修飾服務的價格和周期見下表：