常見問題
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用于生物醫學(xué)研究的常見病毒載體包括慢病毒、莫洛尼鼠白音請血病病毒(MMLV)、腺病毒和腺相關門森病毒(AAV)等,每種(zhǒng)病毒載體都(dōu)有各子厭自的優缺點。許多因素會(huì)影響到您在實驗中使用什麼(me)類型的病毒術線載體,關鍵因素包括以下幾點:病毒對(duì)靶都近細胞是否具有組織親和性(也就(jiù明購)是說(shuō)能(néng)否有效感染靶細胞)?細胞是分裂黑在的還(hái)是非分裂的?您是想把目的基因瞬廠月時(shí)轉導還(hái)是穩定轉導到宿主細胞基因組中音空?需要什麼(me)樣(yàng)的轉導效率?是否需要特定啓動子驅動靶基因表達頻道?載體應用于細胞培養還(hái)是體内實驗?宿主對(duì農道)病毒的免疫反應是否會(huì)影響您的實驗?下表列出了我少選擇病毒載體時(shí)應該考慮的事(shì)項:放子
慢病毒 | MMLV逆轉錄病毒 | 腺病毒 | 腺相關病毒 | |
組織親和性 | 廣泛 | 廣泛 | 對(duì)某些細胞無效 | 與病毒血清型有關 |
是否能(néng)感染非分裂細胞? | 是 | 否 | 是 | 是 |
穩定整合還(hái)是瞬轉 | 穩定整合 | 穩定整合 | 瞬轉,遊離 | 瞬轉,遊離 |
是否能(néng)自定義啓動子 | 是 | 否 | 是 | 是 |
主要用途 | 細胞培養和動物體内 | 細胞培養和動物體内 | 動物體内 | 動物體内 |
體内免疫應答 | 低 | 低 | 高 | 非常低 |
慢病毒是一種(zhǒng)逆轉錄病毒。一旦感染細胞,病毒的RNA基因組被(b兒笑èi)逆轉錄成(chéng)DNA,然後(hò化笑u)被(bèi)永久整合到宿主基因組中,從而飛舞允許病毒載體上攜帶的基因長(cháng)期穩定表達。慢病毒電線是最常用的基因傳遞病毒系統,因爲它是一種(zhǒng)校一能(néng)將(jiāng)基因高效永久導入哺乳動物細胞的載體。該系統對鄉遠(duì)處于分裂期和非分裂期的細胞都(開睡dōu)具有廣泛的親和性(也就(j間東iù)是說(shuō)它可以感染多種(zh那志ǒng)類型細胞),且具有相對校頻(duì)低的細胞毒性或免疫反應。慢樹快病毒可以産生較高的病毒滴度(>108 TU/ml),在最佳條件下,對(duì)體外培養細胞的轉導厭放效率可接近100%。雖然慢病毒主要應用于體外轉導細胞培養,但商雜它也可用于體内動物實驗。
MMLV是一種(zhǒng)類似慢病毒的逆轉錄病銀生毒,也具有廣泛的親和性并可以穩定整合間會到宿主基因組中,從而允許基因的穩開拍定表達。然而,MMLV不能(néng西懂)有效地感染非分裂細胞,并且會(hu數月ì)産生比慢病毒更顯著的細胞免疫反應。此要他外,MMLV和類似的逆轉錄病毒的病毒滴度通常僅爲慢病毒的約十風頻分之一。MMLV載體的另一個主要缺點是不能(néng)自空影主選擇用于驅動靶基因(GOI)表達的啓動子,而是由病麗好毒5’ LTR來驅動目的基因的表達。相反,慢病毒農都、腺病毒和AAV都(dōu)允許選擇自定義啓動子驅動GO視姐I表達。基于以上原因,MMLV的使用已經(jīng)減少,并逐你要漸被(bèi)慢病毒替代。然而,由于村數曆史和某些技術原因,MMLV仍然用于一些應用,如iPS少秒細胞。
當腺病毒感染細胞時(shí),其基因組并不整合到宿主基因組中,而是在感染細去放胞内保持遊離狀态。由腺病毒載體攜帶的基因表達通常是短暫的,特别是在人舞快速分裂的細胞中。許多細胞類型(分裂的和非分裂)都(dōu)可以用腺事靜病毒轉導,但某些細胞由于缺乏适當的細胞表面(miàn)受店民體,因此不能(néng)被(bèi)有效轉見友導。腺病毒感染引起(qǐ)的細胞和體内免疫應答可能(néng)是顯著(zhe件學)的,并且可能(néng)幹擾某些實驗。腺病毒可以産生很高的樂的病毒滴度(>1010 TU/ml),這(zhè)有利于高效地轉導易感性靶細胞。腺病毒主要用于體吃雨内基因傳遞,如基因治療和疫苗接種(zhǒ北銀ng)。
AAV是另一種(zhǒng)通常用于唱麗産生瞬時(shí)基因表達的非整合遊窗姐離型病毒。與腺病毒不同,AAV具快光有非常低的免疫原性,在體内幾乎完全是非緻病性的,且在大多數情況下可以在生物安全作用1級(BSL1)的實驗室中進(jìn)行操作。AAV可以感染靜電分裂的和非分裂的細胞。當使用VectorB習路uilder的AAV載體包裝病毒時(shí),可以通過(guò)是聽使用不同的衣殼蛋白進(jìn)行病毒包裝能(néng)夠賦予病毒不同的血清鐵計型。不同血清型的病毒具有不同的組織親和性,因此當試圖感染特定組織類型時(sh場服í)應當注意選擇合适的血清型。大多數AAV樣作服(yàng)品具有相當高的滴度,使其成(現就chéng)爲高效的基因傳遞系統。AAV什他是許多動物研究的理想病毒載體系統。不資
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參考文獻 | 主題 |
J Virol. 72:8463 (1998) | The 3rd generation le街地ntivirus vectors |
Curr Gene Ther. 5:387 (2005) | Tropism of lentiviral vectors |
Exp Hematol. 31:1007 (2003) | Review of retrovirus-mediated不還 gene delivery |
J Virol. 61:1639 (1987) | Extended packaging signa微輛l increases the ti為妹ter of MMLV vectors |
Gene Ther. 7:1063 (2鐵長000) | Tropism of MMLV vectors dep亮計ends on packaging cell line雜資s |
Proc Natl Acad Sci U S A. 91:88明著02 (1994) | The 2nd generation金下 adenovirus vectors |
Methods in Enzy.訊商 507:229-54 (2012) | Review of AAV virology and uses |
Curr Opin Pharmaco山到l. 24:59-67 (2015) | AAV use in gene家短 therapy, and serotype diff紙坐erences |