爲什麼(me)我測定的病毒滴度與商家測冷習定的不一緻?

不同人測定的病毒滴度往往不完全相少討同，可能(néng)是測定方法不同引起(qǐ)的，也可能動了(néng)是病毒降解引起(qǐ)的。我們采用不同的方法測量不同類子市型的病毒的滴度，詳情請閱讀“VectorBuilder是如美謝何測定病毒滴度的?”。

如果您測定的病毒滴度與我們測定的結果差别明顯，有可能好慢(néng)是采用了不同的分析方法。例如到車，我們采用p24 ELISA法測定慢病毒滴度，而一些實驗室喜歡采用更計購經(jīng)濟的測定慢病毒的RNA的qPCR員店方法。有些實驗室也喜歡采用更爲直接的方法請化，例如FACS或定量菌落形成(chéng)單位法。不算著同的測定方法各有利弊，得到的慢病毒滴度值也各不相同。

即使采用相同的方法，由于其他因素的影響，病毒滴度也會(huì錯日)而存在差異，比如不同的實驗模型、采用不同的試劑或者實驗相線室所用儀器的靈敏度問題等。一些常見例子，如呢快Polybrene在慢病毒轉導實驗中的不恰當使用（Polybrene可能(né爸議ng)對(duì)某些細胞類型也如有毒性），或者所使用的細胞或者物種(zhǒng)不能(néng)被(bèi)病綠姐毒有效感染。另一類潛在問題是試劑或者檢測儀器（例水女如,顯微鏡）的靈敏度不足以鑒定單個病毒的整會妹合事(shì)件，導緻病毒滴度被(bè國湖i)低估。個别情況是滴度測定方案中一些小的技術細節也會(老近huì)對(duì)病毒滴度值産生很大的影響。例如，AAV滴度黑呢測定通常采用qPCR方法，主要原理是對(duì)病毒液中病毒基因分鐵組的拷貝數進(jìn)行定量檢測下水，qPCR引物靶位點的選擇對(duì)于精确評估AAV滴度非常關鍵。在我們的A科你AV滴定方法中，qPCR引物被(bèi機工)設計在AAV ITR元件上，這(zhè站湖)是業界最普遍的做法。使用ITR特異性引物測定的病毒滴度與使用靶向(x票學iàng)其他位置的引物（比如在ITR之間的區域的引物）測定的結果差船紅異會(huì)很大，這(zhè術現)是由于病毒ITR本身序列和位于ITR之間的序列在擴增效率上存在差異，這(樹朋zhè)種(zhǒng)差異是由ITR存在二級結構引起黑地(qǐ)的。另外，引物退火條件（例如，退火的溫度和退火效率）也被(bèi)發事為(fā)現會(huì)影響AAV的滴度值。

除滴定方法外，病毒對(duì)于保存和操作條件樹用的敏感度也會(huì)帶來滴度測定的差異。包膜病毒在反複凍融或者儲存溫度高水水于-80°C條件下能(néng)快速喪失畫爸感染能(néng)力。病毒保存液作好若含有破壞核酸或者影響蛋白結構的成(chéng)分（例如洗滌劑和核酸酶），都(機做dōu)會(huì)降低病毒的感染效率。此外，病毒的純度也被(bè要呢i)認爲對(duì)病毒的穩定性有影響。與慢病毒相比，AAV和腺病毒穩定服海性更好(hǎo)，盡管如此，非純化的AAV和腺病毒被(bèi)能章發(fā)現有被(bèi)蛋白酶降解的地的嫌疑，因此反複凍融會(huì)表現出更低的滴度。

如果您打算在您的研究中使用病毒，我們強烈建議您在自己的實驗模型中對(duì冷務)病毒進(jìn)行檢測和優化，以更好(hǎo門輛)的展示出每種(zhǒng)病毒系統在您研究的特定條件下的表現。