我應該使用哪種(zhǒng)熒光蛋白？

近年來已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許討雨多熒光蛋白(FPs)，使用哪種(zhǒng樹土)熒光蛋白（FP）跟多種(zhǒng)因素有關。

單色實驗

對(duì)于單色實驗，綠色熒高還光蛋白是最常用的。EGFP是最受歡迎的綠色熒光蛋能山白，是許多單色研究的理想選擇。然而，其他綠色熒光蛋白好西，如TurboGFP（又名max湖月GFP），對(duì)于某些應用可能(néng)是愛筆一種(zhǒng)更好(hǎo)的選擇。TurboGFP比EGFP具有草河更優越的功能(néng)，如更明亮的綠色熒光，成(chéng)熟速度更快，筆呢對(duì)高pH值和光穩定性耐受更強，理冷這(zhè)些使其成(chéng)爲早期信号檢測和高靈敏度實驗的理想選擇白村。如果是紅色熒光蛋白，mCherry則由于其單體結構科他，良好(hǎo)的熒光性質和低毒性等特點使其成(chéng)爲大多數實驗的信道選擇，它特别适用于蛋白标記或者當細胞中其他紅化討色熒光蛋白發(fā)生細胞毒性或蛋白聚集時(shí)。在熒光蛋白發(廠些fā)生二聚化和聚集的情況下，dTomato依然可以發得子(fā)出很亮的熒光。DsRed_Express2是另工到一個紅色熒光蛋白的理想選擇，它是具有最小細胞毒性的紅色上少熒光蛋白。

多色實驗

對(duì)于同時(shí)使用多個熒光基團來什的實驗（包括熒光蛋白和其他染料如DAPI），研究人員必須仔輛個細考慮熒光基團的光譜性質，以确保激發(f行明ā)光和發(fā)射光可以在顯微鏡、流式細胞儀或其他熒呢白光檢測設備的濾光片上可以進(jìn)從謝行觀察區分。通常情況下，熒光檢測設備應該能(néng)夠校銀讀出每種(zhǒng)熒光的熒光信号，而相互間資不幹擾。通過(guò)使用激發路山(fā)濾光片來激發(fā)目的熒農黑光基團産生合适頻率的激發(fā)光，使用發(fā)射濾片控制目的熒光機師基團的發(fā)射熒光進(jìn)入熒光檢測器。對(duì慢一)于兩(liǎng)種(zhǒng)顔色，标準坐聽綠色熒光蛋白如EGFP加上标準紅色熒光蛋白如mCherry幾乎在所有水河熒光顯微鏡和流式細胞儀上都(dōu)能(néng)正常工作。對(duì)于三站科種(zhǒng)顔色，藍色、綠色和紅色熒光蛋白組合（會中如TagBFP + EGFP + mCherry）或青色、黃色和紅色組合（道離例如CyPet + YPet + mCherry）可以很好是算(hǎo)的一起(qǐ)配合工作，因爲這(員街zhè)些組合在大多數熒光顯微鏡或流式細胞體著儀上易于分辨觀察。

熒光共振能(néng)量轉移（FRET）

熒光蛋白廣泛應用于基于熒光共振能(知器néng)量轉移（FRET）的實驗中。FRET是一種(業到zhǒng)物理過(guò)程，在此期間，受激發(fā)供體發(fā)色基團讀哥分子通過(guò)非放射性偶極間耦合將(jiāng)能(néng)量轉移到但好受體發(fā)色基團。FRET會(huì)導緻供體熒光強度衰減，而受體發上市(fā)射熒光增加。FRET需要一些前提條件：供體和受體必人林須很接近（10-100Å）；受體的吸收光譜必須與供體的發(fā)射光譜重市信疊；供體和受體的躍遷偶極方向(xiàng)必須是平行的。F煙校RET是距離依賴型的，且FRET的效率與供體和這數受體之間距離的六次方成(chéng)反比。因此，它腦月對(duì)于距離的微小變化非常敏感，使其成(chéng)爲許多西放研究應用的強大的工具，如研究DNA或蛋白質結構，研究分子間相互作用等。青舊的—黃色供體/受體對(duì)CyPet-YPet常用于FRE議算T實驗。

我們的建議：

單熒光：EGFP，TurboGF又匠P，mCherry，dTomato或DsRed_Express2來票（這(zhè)些熒光蛋白可以跟DAPI一起(qǐ)使用）

雙熒光：EGFP + mCherry或TurboGFP + mCh這讀erry （這(zhè)些組合可以跟DAPI一起(qǐ)使用）

三熒光：TagBFP + EGFP + 看她mCherry或CyPet + YPet + mCher道務ry （如果使用合适的濾片，第二種(雜亮zhǒng)組合可以跟DAPI一起(qǐ)使用）

FRET-based應用：CyPet - YPe話相t

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