我應該在多順反子表達盒中使用IRES還(hái跳司)是2A肽（以及哪個2A肽）？

當您希望使用單個啓動子驅動多個我線ORF的表達時(shí)，您可以選擇將區新(jiāng)多個ORF置于啓動子後(hò聽們u)面(miàn)，通過(guò)連接子（linkers）如内部就風核糖體進(jìn)入位點（IR知我ES）或2A肽將(jiāng)每個ORF分隔開(kāi)，單個mRNA轉錄南好物將(jiāng)會(huì)産生多個房動蛋白。

作用機制

最常用的IRES元件來源于腦心舞城肌炎病毒（EMCV），作爲額外的核糖體募集位點起(qǐ)作用，允照區許翻譯起(qǐ)始發(fā)生在除了翻譯起(qǐ)始位點之外的m中道RNA内部區域。

2A肽是來源于病毒的短肽（〜18-25個氨基酸）熱你，它們通常被(bèi)稱爲“自我剪切”肽，能(néng)使一西房條轉錄産物産生多種(zhǒng)蛋白。2A肽并不是完全的“自秒分我剪切”，而是通過(guò)使核糖體跳過(guò)2A元件C-末端的甘氨酸和筆也脯氨酸肽鍵的合成(chéng)而發(fā)揮作用，最終海會導緻2A序列末端和下遊産物分離。其章家中，上遊蛋白的C端將(jiāng)會(huì)添加一些額外音那的2A殘基，而下遊蛋白的N端將(jiāng)會(huì)有額外的脯美遠氨酸。目前有四種(zhǒng)常用的2A場南肽，分别是P2A，T2A，E2A和F2A，來源于四種(相東zhǒng)不同的病毒。

兩(liǎng)種(zhǒng)連接子（linkers）的優缺和門點

IRES優于2A肽的關鍵優勢在于它不影響上下遊ORF的蛋白序公體列。

IRES的主要缺點是與上遊ORF相比，下遊ORF的表達水平比較低（通常爲上遊路算的10%-20%）。這(zhè)理謝就(jiù)是爲什麼(me)當人們在IRES後(hòu)表達熒光蛋白時(很些shí)，常常難以獲得可檢測的熒光信号，特别是在體内應用。此外，IRES元件的不事大小（>500 bp）也票關可能(néng)會(huì)增加載體構建和病毒包裝的難度。

2A肽優于IRES的關鍵優勢在于下遊ORF的表達水平與上遊O得身RF相當（或者略小于）。

2A肽的缺點可能(néng)是會(huì)術議在上下遊ORF留下附加殘基，從而可能(nén場雨g)産生不良影響。2A肽的自我切割并不是10如爸0％有效的，其效率會(huì)受上這說下遊ORF序列的影響。因此，不能(néng)進(jìn)行有效自我切熱見割的融合蛋白將(jiāng)會(huì)是一種(zhǒng新畫)翻譯産物，在某些實驗運用中，這(zhè)是一個值得注意的問題。

如果您的實驗不需要第二個ORF的高水平表達（如藥物篩選标記），那麼(me)數習IRES應該是可以滿足實驗要求的。然而，如果拿舞多順反子中存在兩(liǎng)個以上的ORF，或者等量放線共表達多個ORF很重要，我們建議您使用2A肽。

不同2A肽的比較

在四種(zhǒng)常用的2A海山肽（P2A，T2A，E2A和F2A）中，P2A通常具有最高的切割效率（在某吧了些情況下接近100％），接下來是T2A，其次是E2做員A和F2A。F2A的切割效率僅爲約50％，我們通常推電年薦在多順反子中使用P2A或T2A。

參考文獻

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