我應該使用熒光蛋白，熒光素酶還(hái)是L藍離acZ？

熒光蛋白，螢光素酶和LacZ都對照(dōu)是基于重組蛋白的報告基因，可以用于定人黑位或成(chéng)像研究。然而，這(zhè)幾類蛋白各有子暗不同，适用于不同的實驗設計。

熒光蛋白和螢光素酶都(dōu)屬于發(fā)光蛋白，可用開多照相機或類似的裝置來檢測熒光表達。熒光蛋白通過(guò)吸收一種(紅樂zhǒng)顔色的光（激發(fā)），然廠術後(hòu)發(fā)出不同顔色（發線道(fā)射）的較低能(néng)量光來起(qǐ)作用。相反，螢微問光素酶（和其他生物發(fā)光酶）通過(guò)催化底物（即螢光素）發事就(fā)生化學(xué)反應而發(fā)光。

熒光蛋白比螢光素酶明亮得多，這(zhè)有利于將(j靜煙iāng)其應用到許多不同類型的實驗中。但是，在組織樣(yà年請ng)品或活體動物中，背景、自發(f內國ā)熒光和光散射等問題可能(néng)會(huì)影響熒光筆車的觀察。熒光素酶的活性分析需要螢光素，所以在分析之前必須將(jiā服但ng)該底物加入培養基或注射到活拍到體動物體内。與熒光蛋白相比，這(zh些市è)可能(néng)會(huì)影響實驗的重複性或定量水為。

與上述兩(liǎng)種(zhǒng)标記不同，LacZ不發(fā)友厭光。相反，LacZ基因的産物β-半乳糖苷酶可以催化X-gal轉化成(雜裡chéng)類似于靛藍的不透明藍色化合物。爲了使草匠LacZ可視化，首先必須將(jiāng)樣(yàng)品自師用X-gal溶液染色，且該染色師討步驟與活體樣(yàng)品觀察不兼容。盡管高度敏感，但La影朋cZ/X-gal染色是非定量的，并且不能(nén師些g)提供類似熒光或生物發(fā)光蛋白的高分辨率。

通常情況下，我們建議LacZ用于整公現體胚胎或組織切片的基因表達研究。對(duì)于活體動物研究來說(shu車校ō)，熒光或生物發(fā)光可能(néng)是更好(做草hǎo)的選擇，但也跟多種(zhǒng)因素到雪有關，如是否需要對(duì)内部深層組織進(jìn)行成(ché說愛ng)像以及是否存在标記亮度問題。