爲什麼(me)我的原核表達載體沒(mé些費i)有表達目的蛋白？

表達菌株不合适

表達載體在不适當的宿主菌株中可能(néng)無法進(如得jìn)行誘導表達。VectorBuilder大吧你多數載體的克隆宿主菌株都(dōu)是要我Stbl3（具體詳看載體報告）。Stb13能(néng)夠保持質粒的穩員黃定性，是優選的克隆宿主，但它可能(nén暗雨g)不适用于重組蛋白表達。例如，對喝見(duì)于pET載體，IPTG誘導的重組蛋白表達鐘商需要含有T7 RNA聚合酶的宿主菌株，而Stbl3科司卻沒(méi)有。因此，原核細菌表達風湖載體通常需要將(jiāng)質粒轉移到合适的宿主菌如BL21能讀（DE3）中進(jìn)行誘導表達。

載體上表達的蛋白“有問題”

有時(shí)候，當表達的蛋白能的是非溶性的，或折疊錯誤，不當切割或對(duì)細菌學吃宿主有毒性時(shí)，目的蛋白往往不能(n在業éng)正常誘導表達。在這(zhè民遠)種(zhǒng)情況下，您需放廠要優化誘導條件（詳見下文），或者替換成(chéng)更耐受的宿主菌株或更換表達如嗎載體類型。

誘導條件有待優化

根據待表達基因，表達載體和宿主菌株等因素，您可能錢船(néng)需要考慮優化以下誘個裡導條件：OD₆₀₀（通常爲0.6-0.8）；誘導劑（如IPTG或L-阿拉伯糖）的濃度門技不能(néng)太低或太高；誘導持續時(shí)間樹匠不能(néng)太短或太長(cháng)；誘導溫度，特别是在處理好影“有問題”蛋白時(shí)（見上文），可以測試不同的溫度梯度（如從費16°C，25°C，30°視道;C，37°C等）。在極少數情況下大妹，由于原因不明，相同表達載體的不同克隆可能(樹動néng)會(huì)表現出不同的表達能(néng)力，因此您可能下船(néng)需要挑選多個單菌落進(jìn)行單獨測草知試，以篩選出具有最佳誘導效果的克隆。

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