爲什麼(me)我的質粒提取産量這(zhè)麼(me)低？

質粒上的複制起(qǐ)點屬于低拷貝型海來

質粒的拷貝數是由質粒上的複制起(qǐ)點決定的，有的複制起(qǐ)術森始點屬于低拷貝型。請确認質粒上複制起(qǐ)點類型。對(duì)于低拷貝質我工粒，則需要擴大細菌培養量以獲得足夠的質粒DNA。

進(jìn)一步了解VectorBuild關體er不同載體複制起(qǐ)點拷貝數

用于質粒提取的菌量過(guò)少

請檢查确認質粒制備柱的結合容量以及您的質粒是高拷貝還(hái)是低拷貝質粒在電。對(duì)于小量提取，我們建議章飛您收集1-5 ml過(guò)夜培高的養菌液。對(duì)于大量提取，如果質粒是高拷貝，我們費地推薦使用100-150 ml過(guò)夜培養菌液；如街空果是低拷貝，我們推薦使用300-500 ml過(guò)夜培養菌液。一都機般情況下，對(duì)于高拷貝質粒，1 ml的個明過(guò)夜培養菌液可以小量提取〜5 ug的質黃弟粒DNA，150 ml的過(guò)夜培養菌液可以提取〜500照不 ug的質粒DNA；對(duì)于低拷貝質粒（如pET行遠），1 ml過(guò)夜培養劇那菌液可以小量提取1.5-2.5 μg質粒DNA，150 不他ml過(guò)夜培養菌液可以提取150-200 μg質粒歌哥DNA。

隻有小部分菌體含有質粒

有的抗生素，尤其是氨苄青黴素，在液體培養中會(huì)快速降解，導緻不含質粒湖習的細菌可以大量繁殖，最終使得質粒制備産量低。爲了避免這(們上zhè)種(zhǒng)情況，請在使用前新鮮制備含氨苄青黴行藍素的生長(cháng)培養基，并确保提供足夠的濃度雜兵。另外，在培養具有氨苄抗性的細熱美菌時(shí)，請不要讓菌液飽和培養時(shí)愛去間過(guò)長(cháng)懂樂。因爲随著(zhe)培養時(shí)間的增加，培養基的抗生素歌腦會(huì)越來越少，許多細菌細胞也已商報死亡且它們所含的質粒DNA會(huì)被(bèi)降解，所以從過討西(guò)飽和培養的菌液中提取的刀內質粒DNA産量會(huì)低。請從新鮮菌液提取質粒DNA，如果不能路街(néng)立即進(jìn)行質粒制備，則可以將(j書要iāng)菌體離心沉澱，并儲存于-80°C冰箱中備用。生術

直接取甘油菌進(jìn)行接菌培養

直接將(jiāng)從VectorBuilder收到的甘油菌或穿唱匠刺菌進(jìn)行接種(zhǒng)，可能(néng用器)會(huì)偶爾出現質粒制備産量低的情況。我們建議先在含有适當抗生素的LB來師平闆上劃線，然後(hòu)挑取單菌落接種(zhǒng)到含有相應抗生愛器素的新鮮液體培養基中。具體操作說(shuō)明吃喝請在菜單欄“學(xué)習中心”>“資料下載”> “甘油菌”進(jìn)行查看。

沒(méi)有正确使用質粒提取試劑盒

請在使用前仔細閱讀質粒制備試劑盒使用說(shuō)明書玩電，防止不當操作。

質粒制備柱質量較差

某些品牌的質粒DNA制備柱質量較差，請及時(shí)檢測更換相玩數應試劑盒。