雲舟生物提供全面(miàn)的shRNA基因敲低解決方案，幫助您獲得高效的家地RNAi效果。我們提供基于U6啓動子驅市答動的shRNA的和自定義啓動子驅動的miR30 shRNA的兩(liǎng)種機間(zhǒng)shRNA表達方式，根據您的實驗需求可靈活控制月術shRNA的表達。我們可以對(duì)shRNA載體進(jìn)行多種男請(zhǒng)類型多種(zhǒng)滴度的病毒包裝（如慢病毒、AAV個草、腺病毒），以幫助您將(jiāng)shR工笑NA遞送至難以轉染的細胞中。我們還(hái)可以專門爲哺乳動物細胞中站在的大規模基因功能(néng)喪失篩一熱選構建shRNA文庫。此外，我們的線載體設計平台與s討線hRNA 數據庫涵蓋了多種(zhǒng)物種(zhǒng)，讓您輕松找到合适黑兒的shRNA打靶您的目的基因。
亮點
定制shRNA載體
使用我們高度直觀的線上載體設計平台，你可以選擇超過暗們(guò)30種(zhǒng)包括但媽病毒類型與非病毒的shRNA載體骨架，并且來計可以自由組合啓動子、報告基因、藥篩标記等載體元件。我們的shRNA新劇數據庫可幫助您方便地選擇打靶目的基因的sh近車RNA，同時(shí)無需您自行設計序列。我們還(hái)計吃同時(shí)提供shRNA打靶效率檢測載體，以讓您可以測試您的shRNA日書的幹擾效率。 對(duì)于我們的shRNA載鐵鐵體，您均可購買額外的下遊服務，如質粒DN民新A制備和病毒包裝服務。
除去以上的列表中的載體系統，我們還(hái)可以提供Cre-lox條件照外表達shRNA載體。請發(fā)送設計咨詢給我們。
常用shRNA載體
雲舟生物提供一系列常用shRN黃微A載體，可表達scramble shRNA或照載體上的常見基因的sh看費RNA。在將(jiāng)這(zhè)些載體加入購物車之後(hòu鄉對)，您還(hái)可以購買質粒DNA提取和病毒包畫理裝等下遊服務。 您可以使用下方的載體工愛草具欄訂購您的U6 shRNA載體。
如果您需要訂購miR30 shRNA載體，請向(xiàng)我們發(fā)紙章送設計咨詢
shRNA病毒包裝
我們提供多種(zhǒng)規格的的優質的慢病毒、市草AAV 和腺病毒包裝服務，可以將(jiāng)shRNA遞送隻難轉染的靜船細胞中。我們擁有專有的技術和試劑，事暗大大改進(jìn)了病毒包裝的滴度、純度、活性和一緻性，還(hái)可以針對(著裡duì)病毒包裝時(shí)的所使用的病毒載體進(jìn)行優化物就。
shRNA（3+1）套裝
需要注意的是，并非所有經(jīng)驗設計的shRNA均會(紙電huì)有良好(hǎo)的幹擾效果。shRNA的幹擾效果取決于多個因素，包師務括shRNA的長(cháng)度、莖環結構、GC含量、sh謝關RNA的熱力學(xué)穩定性、靶他但序列的二級結構、對(duì)于其它基因的脫靶效應等。一般來說(shuō風學)，約50%~70·%的shRNA具有可見的幹擾效果，而遠呢其中的20-30%具有強的幹擾效果。因此，選擇多黑秒個shRNA用于打靶有助于發(fā)現敲低效率最高的shRN司很A。
雲舟生物提供的shRNA（3+1）套裝包含3睡妹個針對(duì)你的目的基因的定制s要秒hRNA載體、3個對(duì)應的定制sh得現RNA病毒，以及一個可用于測試多個shR老長NA的高性價比的scramble對(du吧國ì)照病毒。我們目前提供慢病毒、AAV以及腺病毒弟風的shRNA（3+1）套裝。
您可以使用下方的工具欄訂購shRNA（3+1）套裝。
請注意該工具欄隻适用于設計U6 shRNA載體。如果您需要設計miR村生30-shRNA或IPTG誘導表達的shRNA載體，或者無法找到您爸大的打靶基因，請發(fā)送設計咨詢給我們。
如果您僅需要構建3個shRNA質粒載體，我們亦提供shRNA載體3件裝套裝，詳很一情如下。
| 服務名稱 | 價格（CNY） | 周期 | |
| shRNA慢病毒載體（3件裝）看樂構建 | ￥1,980 | 4-7天 | 訂購咨詢 |
| shRNA腺相關病毒載體（3件裝）構建 | ￥1,980 | ||
| shRNA腺病毒載體（3件裝）構建 | ￥3,880 | 6-12天 |
shRNA文庫
shRNA文庫在研究疾病通路、藥物治療中的細胞反應、發(fā)風河育過(guò)程、基因調控方面(miàn)，是進(jìn)行大規模基因服們功能(néng)喪失篩選的強大且高性價比的工具。根煙熱據您的需要，我們可以把構建的文庫轉化快綠大腸杆菌，也可以以DNA或病毒的形式爸習給您發(fā)貨。我們定制的文庫都(dōu)會(huì)進(jìn)行N窗懂GS測序驗證以确定文庫的質量。
我們提供高質量的針對(duì)人和小鼠基因的短謝shRNA慢病毒文庫産品。對(duì)于每個物種(zhǒng)，我們提供了兩(得化liǎng)種(zhǒng)規格的慢樹高病毒shRNA文庫産品：全基因組大庫（針對(duì)約19,000個RefSe音熱q基因）和精華基因小庫（針對(du商冷ì)PubMed Central上約2爸樹,000個最常被(bèi)引用的基因），每個基因對(duì亮民)應5-6個不同的shRNA。我們的shRNA文庫已通過(guò)了NGS科年測序和功能(néng)驗證。
預制shRNA文庫的亮點
| 産品名稱 | 基因數量（個） | shRNA數量（條） | 規格* | 貨号 | 價格（CNY） | |
| 人類精華基因shRNA文庫 | 2,161 | 12,471 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1037bjk) | ￥13,980 | |
| 小鼠精華基因shRNA文庫 | 2,233 | 12,472 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1039sgb信友) | ￥13,980 | |
| 人類全基因組shRNA文庫 | 18,432 | 92,917 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1038ngq) | ￥13,980 | |
| 大規格 (>1.0x108 TU/ml, 5 ml) | LV5M(Lib190505-1038ngq) | ￥17,480 | ||||
| 小鼠全基因組shRNA文庫 | 19,790 | 92,917 | 标準規格 (>1.0x108 TU/ml, 1 ml) | LVM(Lib190505-1042tfx) | ￥13,980 | |
| 大規格 (>1.0x108 TU/ml, 5 ml) | LV5M(Lib190505-1042tfx) | ￥17,480 | ||||
* 對(duì)于精華基因文庫跳線，标準規格包裝的慢病毒可以滿足>40次篩紅算選的要求，且達到100x的覆蓋率。對(duì)于全基因組文庫，我廠标準規格包裝的慢病毒可以滿足>5次篩選的要快懂求，且達到100x的覆蓋率；大規格包裝的慢病毒可以滿足>2些件5次篩選的要求，且達到100x的覆蓋率。
shRNA基因敲低細胞穩轉株
雲舟可爲您提供長(cháng)期敲低目的師視基因的需求定制構建shRNA敲低細胞穩轉株。廠明我們基于shRNA分值測試三個候選的shRNA，然到話後(hòu)將(jiāng)最佳敲低效率的一個通過(guò懂鄉)慢病毒轉導生産細胞穩轉株。我們從在通過(guò)RT-PCR驗證細胞中的基因敲低水平。此外房輛，我們還(hái)會(huì)進(jìn)行一系列标準的QC美信檢測，如無菌檢測、支原體檢測，然後(hòu)才會(hu門票ì)放行最終的細胞産品。
| 細胞模型 | 構建方式 | 交付内容 | 價格 | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| shRNA基因敲低穩轉株構建 | 慢病毒轉導 | 多克隆細胞群 | ￥18,980.00起(qǐ) | 8-13周 |
| 單克隆細胞株 | ￥23,980.00起(qǐ) | 13-18周 |
短發(fā)夾RNA（Short hairpin RNA，shRN服志A）是具有莖環結構的RNA分子，可用于通過(guò)互補堿基配對(duì)年妹靶向(xiàng)mRNA序列并促使其降解，店就因此廣泛用于各種(zhǒng)R北化NAi應用。通常可以使用雙鏈DNA載體以病毒和非病毒形式將(ji讀大āng)shRNA引入靶細胞。當用shRN件兵A載體轉染或轉導細胞時(shí)，shRNA在細胞核中轉錄形成(來報chéng)發(fā)夾結構。shR知雜NA發(fā)夾結構包含一個莖環，一條RNA反義鏈和與其互補的正義事體鏈。轉錄形成(chéng)的s土腦hRNA離開(kāi)細胞核，在細胞質中經(jīng)過(guò)Di海花cer加工，然後(hòu)加載到RNA誘導的沉默複合體哥靜（RNA-induced silencing complex，RISC）複合體什在上，随後(hòu)目标mRNA被(bèi爸店)識别并降解（圖1）。
圖1 U6 shRNA和miR-shRNA離動介導的基因敲低
shRNA相對(duì)于siRNA具有顯著的在基因敲低效率鐵人上的有時(shí)，因此成(chéng)爲流行的RNAi方式。下表總結遠東了兩(liǎng)者的具體的特點快好：
| shRNA基因敲低 | siRNA基因敲低 | |
|---|---|---|
| 遞送方法 | 根據載體類型進(jìn)行轉染或者轉導 | 轉染 |
| 敲低時(shí)長(cháng) | 長(cháng)期 | 瞬時(shí) |
| 遊離體抑或穩定整合 | 根據不同的遞送方式，可具有遊離體或者穩定著玩整合的形式 | 遊離體 |
| 添加篩選标記 | 可添加熒光或者藥物篩選标記 | 否 |
| 适用細胞類型 | 适用于相當廣泛的細胞類型 | 隻适合易轉染細胞 |
| 脫靶效應 | 低 | 高 |
| 自身降解速度 | 低 | 高 |
控制shRNA表達
有兩(liǎng)種(zhǒn件東g)常用方法來控制載體上的shRNA表達：基于U6啓謝到動子的shRNA 表達和基于m現筆iR的shRNA表達。雖然基于U6的shRNA載體使用 RNA聚合酶III啓動火土子驅動簡單莖環 shRNA 的表達，基于miR的shRNA 載們吃體則使用RNA聚合酶II啓動子表達适配microRNA支架劇得的 shRNA。這(zhè)兩(liǎng)種(作影zhǒng)shRNA在細胞質内通過(guò)相似的機制被(bèi)加工，最開我後(hòu)導緻靶基因沉默。然而，在細胞核内轉錄後(hòu)，基于miR的s討朋hRNA與基于U6的shRNA白來不同，由于其結構内存在miR内源序列，其加工方式更像初級miRNA（圖1船來）。
miR shRNA載體中的RNA聚合酶I林一I啓動子包含了組織特異性、可誘導的或可變強度等啓動子等類型，從而使其電生可應用于組成(chéng)型U6啓動子無法站錯應用的各種(zhǒng)實驗場景。相對(duì)于其村短它的基因敲低載體系統，RNA聚合酶II啓動子在基于miRNA個爸的shRNA系統中可有效轉錄長(cháng)轉錄本，因此該低你系統具有幾個額外優勢。比如說(shuō)，可以多個shRNAmiR可以轉錄爲單北廠個多順反子，且在細胞内可加工形成志空(chéng)成(chéng)熟的shRNA。這(zhè地朋)允許使用單個轉錄本敲低多個基因或靶向(xiàng)同一基因的多個區域。因此，務生該載體可用于表達單個或多個shRN光間AmiR。其次，在該載體系統中，用戶選擇的蛋白質編碼基因可跳少以放在shRNAmiRs的多順反子中。此ORF的表達店子可用于直接監測shRNA轉錄（海紙如果使用标記基因ORF）或用于厭數需要ORF和shRNA共表達的其他件匠情景。
雖然miR shRNA載體在控制shRNA表達上很人更爲靈活，我們發(fā)現U6 shRNA載體相對(duì)miR shRN劇音A載體的敲低效果的魯棒性更佳。因此除民妹非必須使用miR shRNA載體，通過(g吧從uò)我們會(huì)推薦首先使用U6 s對綠hRNA載體用于RNAi實驗。
下表比較了U6 shRNA載體與mi學紙R shRNA載體的特點：
| U6 shRNA載體 | miR shRNA載體 | |
|---|---|---|
| shRNA結構 | 簡單的莖環shRNA | shRNA 适配一個microRNA 骨架 |
| shRNA長(cháng)度 | 50-70 nt | >250 nt |
| 啓動子 | RNA聚合酶III啓動子，如 U6和H1 | RNA聚合酶II啓動子，如廣泛性啓動子和組織特異性現歌啓動子 |
| shRNA加工機制 | 隻在細胞質中經(jīng)過(guò)Dicer加工 | 在細胞核内經(jīng)過(guò)Drosha加工，在細胞質中房志通過(guò)Dicer加工 |
| 一個載體上可表達的shRNA數量 | 通常爲單shRNA | 單個或多個shRNA |
| 是否可以在shRNA轉錄本上表達其它ORF | 否 | 是 |
| 基因敲低效率 | 魯棒性較高 | 魯棒性較低 |
| 毒性 | 高細胞毒性 | 較低的細胞毒性 |
試驗驗證
我們的U6 shRNA慢病毒載體經(j器物īng)過(guò)基因敲低效率驗證，結果如下圖所示。結果展現了不唱U6 shRNA與miR30 shRNA之間的敲低現有效率比較。
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圖2 U6 shRNA慢病毒載體與miR30 shRNA慢病毒載體對(duì關一)EGFP的敲低效率比較。(A)U6啓動子驅動吧但的shRNA表達的慢病毒載體與miR30 shRNA（4條sh數音RNA）慢病毒載體分别包裝成(chéng)慢病毒，然後(h時和òu)轉導穩定表達EGFP的HEK293商熱T細胞。藥篩前後(hòu)流式細胞術檢測EGFP表達情況。（B）藥篩前，E和黃GFP表達在U6 shRNA的作用下減少了46%（P<雨又;0.001）,在CMV啓動子驅動表達的miR30 s藍科hRNA（單shRNA）作用下減少了13%（P<科窗0.001），在CMV啓動子驅動表達的miR30 shRNA（4條的就shRNA）作用下減少了44%（P<資我0.001）。（C）EGFP表達在U6 shRNA的作用下減少分微了72%（P<0.001）,在CMV啓動子驅動表達的miR30 shR業習NA（單shRNA）作用下減少了60%（P<0.00業都1），在CMV啓動子驅動表達的miR30 shRNA（4條shRNA紙分）作用下減少了67%（P<0.001）。EGFP的相對(d做睡uì)表達量通過(guò)轉導與未轉導細胞的熒光強度中值鐘見（Median fluorescence intens妹妹ities，MFI）的比值計算。三次討行重複實驗，圖中顯示SD值，p值根據Tukey檢驗計算。對師
shRNA數據庫
雲舟生物的在線shRNA載體設計工具專門爲多個物種(zhǒng)的shRN拍男A設計進(jìn)行了優化，可幫助您針對(du樹那ì)靶基因設計出高幹擾效率的shRNA序列。我們設計和評估了要shRNA的規則與RNAi consortium（TRC）使用的規則類似。所有來內的幹擾分值均≥0，平均數約爲5廠文，标準差約爲5，95%的分值均≤15。若一個shRNA的幹擾分值路費是15，則表示具有很高幹擾效率且易于克隆；若幹擾分值爲0，則表示幹擾效科快果較差或難以克隆。
當您在我們的在線平台上設計shRNA載體時(shí)，您可以選擇在我們的兵黑數據庫中搜索您的目的基因。輸入您的基因名稱後(hòu)湖美，您將(jiāng)在我們的數據庫中看到針對(duì)遠區您的目的基因的所有shRNA的詳細信息，包括懂藍指向(xiàng)UCSC數據庫的鏈接，山他從而可查看其基因組序列和所有轉錄本。我們的數據庫按照針對(duì)能小目的基因的shRNA的幹擾分值對(duì)shRNA和森進(jìn)行排序，并推舉出三個長紙幹擾分值最高的shRNA。請注意幹擾分值隻是一個參考值理得。實際的幹擾效果可能(néng)會(huì)與預測的分值有看畫偏差，低分值的shRNA也可能海生(néng)産生較好(hǎo)的幹擾效果。同時(shí)，靶向(x來門iàng)轉錄本的 3’ UTR也可以起(qǐ)到幹擾作用對購。 我們的網站包含豐富的學(x在這ué)習資料，可幫助您安排并實施您的RNAi實驗。
參考文獻
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Nucleic Acids Res. 34:e53 (2006); Development of miR155-based shRNA 刀機vectors.
J Gene Med. 9:620 靜村(2007); Development of IPTG-inducible ge通有ne knockdown system.木高
Proc Natl Acad Sci USA. 101:10380 議舊(2004);Development of Cre-lox-re件術gulated gene knockdown syst公請em.
暫無
無論是shRNA介導的基因敲低抑或是gRNA介導的離民基因敲除（如CRISPR或TALEN）都(dōu)可能(néng)是研究基因分開功能(néng)喪失的富有價值的實驗方法。爲了确定哪種(zhǒng)方法最懂看适合您的實驗應用，以下是您應該考慮的一些事(sh煙樂ì)項。
基因敲低載體
基因敲低載體表達shRNA抑制靶基因的西長mRNA，通過(guò)引發(fā)mRNA的切割抑制翻譯過話話(guò)程。shRNA敲低不改變靶基關校因的DNA序列。
基因敲除載體
CRISPR和TALEN都(dōu)是通過(guò)指導核酸和家酶切割基因組中的特定靶位點來發(fā)揮作用。店妹然後(hòu)這(zhè)些切割位點被(bèi)細胞低效地修複，理吧從而導緻修複部位的永久性突變，比如産生習個基因的小片段插入或堿基缺失。這(zhè)類突變的一部分會(huì)導緻子民基因的閱讀框移碼、出現提前終止密碼子等，最終導緻目的基因的功能(n匠光éng)喪失。如果同時(shí)靶向(xiàng)基因組中兩(liǎng)從可個相鄰緊密的切割位點（距離幾個kb），也可以導緻其間區域的删除。
shRNA敲低永遠不會(huì)完全抑制靶基因的表達。即使對(舞分duì)于最有效的shRNA，靶基因的一些殘呢們留表達也會(huì)保留。相比之下，在一小部分經(jī靜白ng)過(guò)處理的細胞群中，CRISP購去R和TALEN可以産生永久性突變，這(zhè)可能(néng)導緻基因功能男要(néng)完全喪失。
shRNA載體通常在轉染/轉導的細胞時(shí)獲得較好(hǎ在農o)的均一性，實驗之間的一緻性也較佳。相比之下，由于從生引入突變是随機的，CRISPR和TALEN的基因編輯效果在細胞之間機話的差異相當大。爲了完全敲除細胞中的目的基因，必須敲除細胞中基市視因的所有拷貝。鑒于正常細胞具有任何基因的兩(liǎng)個拷貝（X或Y連鎖基會街因除外），而癌細胞可以具有兩(liǎn樂機g)個以上的拷貝，這(zhè)種(zhǒng)完全敲除的細胞湖日可能(néng)隻占所有處理後(h能件òu)的細胞的一小部分。出于這(zhè)個原因，核酸酶介導服拿的敲除實驗需要通過(guò)測序來篩選克隆員對，以确定所有目的基因拷貝都(dōu)被科從(bèi)敲除的子細胞群。
已有報道(dào)表明shRNA介導的基因敲低和核酸酶介導的基因敲除均會(又空huì)産生脫靶效應。脫靶效應的表征可以通過(guò)使用多個不同弟這的shRNA 靶向(xiàng)同一基因來評估。如果一個基因公得被(bèi)在多個不同的shRNA作鐵中用下仍然表現出一緻的表征，則這(zhè)種(zhǒng)表征影舞通常則不是脫靶效應帶來的。對(duì)于CRI風門SPR或TALEN基因敲除，應分析含有功能這理(néng)喪失突變的多個克隆，以包含可能(néng)由脫靶高到突變引起(qǐ)的任何表征。此外，可弟木以對(duì)克隆進(jìn)行脫靶位點測序，通過(guò弟農)生物信息學(xué)方法鑒定以查看它們是否已發(fā)生突變。
并不是所有的shRNA都(dōu)會(huì)起(qǐ)作用
根據我們的經(jīng)驗和來自客戶的反饋，冷妹使用3-4個shRNA進(jìn)行幹擾測試關得時(shí)，通常隻有2-3個有比較懂民合理的幹擾效果。所以，在使用shRNA時(shí員姐)，重要的是要認識到并非所有的shRNA都(dō身土u)能(néng)正常工作。通常情況下，約5花科0-70％的shRNA具有幹擾效果，其中隻有約20-30％的shRNA具有比較輛資明顯的效果。如果您使用幾個shRNA靶向(xiàng)同一個基因都(dōu錢商)沒(méi)有一個能(néng)産生滿意的幹擾效果，最好(hǎo)的解嗎電決方式是嘗試更多的shRNA，特别是那些經(j訊是īng)過(guò)文獻驗證的shRNA。目前，許多研究人員使用靶向(x關空iàng)相同基因的shRNA庫（即不同s為資hRNA的混合物）進(jìn)行實驗，以期藍視提高幹擾效率。
幹擾效率檢測方法不當
最常用評估shRNA幹擾效率的靈敏測定方法是RT-qPCR，您可能市遠(néng)需要嘗試幾對(duì)引物，篩選出最具特異性和效率公雨的引物對(duì)。通常情況下，RT-qPCR引拿購物應跨越内含子，即設計在兩(liǎng)個數國外顯子上，以免擴增基因組DNA。當光日使用新引物時(shí)，建議您先進(醫頻jìn)行預擴增實驗，并將(jiāng)子歌PCR産物進(jìn)行電泳檢測目的條帶，或者甚至可以通過(gu訊民ò)測序驗證PCR産物是否正确。在進(jìn)紙音行RT-qPCR的同時(shí)，應問制注意設置minus-RT對(duì玩作)照以評估基因組DNA的污染水平。您可通綠以使用NCBI引物設計工具（https://w和雜ww.ncbi.nlm.nih.gov/tools/木讀primer-blast/）來檢查引物質量。 幹月妹擾效率也可以通過(guò)蛋白明民質印迹法（Western blot）進(jìn)行評估。然而，該方法常産低一生來自非特異性抗體結合的假陽性條帶，銀兵從而導緻誤判沒(méi)有幹擾效果。因此，在使用時(shí著校)需要确保抗體的特異性。 您使用的shRNA可能(néng睡很)隻打靶基因的某個轉錄本 在設計shRNA時(shí)，我們推薦您使用那些能(我我néng)靶向(xiàng)單個基因多個轉錄本的shRNA，除非您也長隻想打靶特定轉錄本。VectorBuilder提供針對(duì)常從腦見物種(zhǒng)的shRNA數據庫。當您將(jiāng)shRNA元費商件插入載體時(shí)，您可以選擇shRNA數歌們據庫，通過(guò)搜索目的基因查看所有可用的shRNA詳細信息。您還(há討在i)可以打開(kāi)其中的UCSC鏈接，查看shRNA序列在基因組和轉錄本中司媽位置等信息。
您使用的shRNA可能(néng)隻打靶基身但因的某個轉錄本
在設計shRNA時(shí)，我們推志老薦您使用那些能(néng)靶向(xiàn是光g)單個基因多個轉錄本的shRNA，除非您隻想打靶視能特定轉錄本。VectorBuilder提供藍街針對(duì)常見物種(zhǒng)的shRNA數據庫。當您將(jiāng)年微shRNA元件插入載體時(shí)，您可以選擇shRNA數鐘暗據庫，通過(guò)搜索目的基因喝服查看所有可用的shRNA詳細信息。您還(hái朋近)可以打開(kāi)其中的UCSC鏈接，查看shRNA序列在基因組銀樂和轉錄本中位置等信息。
我們設計和評估shRNA的規則與RNAi consortium（TRC）使用的弟多規則類似。對(duì)于每個RefSe村話q轉錄本，我們會(huì)搜索出所有的21 m問民ers作爲候選靶位點。以下因素會北坐(huì)降低幹擾效率/特異性或影響克隆，含為是有這(zhè)些特點的序列將(jiāng)會(huì)被(bè一妹i)排除。主要因素包括：含有≥4不了個連續相同堿基，含有≥7個G或C，GC含量司煙<25％或> 60％以及分藍序列的5'端含有AA堿基。如果靶點内部含有莖環結構，或是3'末端的GC含量較呢西高，或是該靶點是已知的miRNA核心序日雪列或是會(huì)打靶到其他基因，聽紅則該靶點的分值就(jiù)會(huì)較低。若靶位點存在于一個基因的多海媽個轉錄本，則該靶點的分值就(jiù)會(huì)較高。 問公所有的幹擾分值均≥0，平均數約爲5，标準差約爲5，95子關%的分值均≤15。若一個shRNA的幹擾分值是15，則表示具有很高幹子謝擾效率且易于克隆；若幹擾分值爲0，則表示幹擾友白效果較差或難以克隆。
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