作爲全球最大的定制載體服務商，雲舟生物可以根據您的實驗需求量身定制國來您的DNA載體。我們擁有超過(guò)200劇志種(zhǒng)經(jīng)過(guò)優化且适用于各種視頻(zhǒng)研究應用的載體系們著統，均經(jīng)過(guò)體外試驗以及部分體内試驗驗證山用。使用我們的平台進(jìn)行載體定制和克隆將(jiāng新工)顯著降低傳統實驗室DIY載體的時(shí)間成(chéng)本并提高載體構們日建的效率。
除了DNA載體的分子克隆外，我們還(h輛站ái)提供多種(zhǒng)相關服務如質粒DNA制備、病毒包裝（慢病來資毒、AAV、腺病毒、MMLV、杆狀病毒等）、文庫構建、BAC店謝突變、點突變、穩轉細胞株構建以及RNA制備等。
亮點
您可以通過(guò)以下方式獲取載體克隆服務：
雲舟生物將(jiāng)以超低價和快周期爲您提供高效、專業的載體構建服務。我窗書們的克隆服務價格比您自己制備克隆所需的試劑成(chéng)本更低，可以農習爲您節省時(shí)間和精力。所有定制的載體都(dōu)經(jīng)能低過(guò)嚴格的質量控制，以确保算村交付的載體符合您的設計要求。最終交付形式是包含影得目的載體的大腸杆菌。價格和周期請參考以下表格。
常規載體構建服務
由雲舟生物提供的标準化骨架和标準化元件進(jìn)行載體火都構建。
常規載體的價格和周期如下：
| 服務類型 | 價格 (CNY) | 周期* |
| shRNA載體構建 | ￥1,080起(qǐ) | 4-7 天 |
| gRNA載體（單gRNA）構建 | ￥1,080起(qǐ) | 4-7 天 |
| gRNA載體（雙gRNA）構建 | ￥2,380起(qǐ) | 6-12 天 |
| 表達載體構建 | ￥1,180起(qǐ) | 3-6 天 |
* 周期的定義：從接受訂單到發(fā中鄉)貨的時(shí)間，不包括客戶準備材料所需要的時(shí)間（例市們如提供模闆DNA）。腺病毒載體可能(néng)需要更長(chán愛厭g)時(shí)間。
複雜載體構建服務
複雜載體是指使用VectorBuilder标準化骨架，但由更爲複雜的需筆自要構建的元件組裝而成(chéng)的載體。它們通常要經(jīng)過(guò)森草多個步驟來構建，并且涉及複雜的操作過(guò下舊)程，例如大片段的擴增、多個片段融合、基因為麗合成(chéng)和靶向(xiàng)突變等。一還
複雜載體的額外價格和周期：
| 克隆步驟 | 額外價格 (CNY) | 額外周期 |
| 插入一個PCR片段* | ￥1,180起(qǐ) | 9-18 天 |
| 插入多個融合PCR片段* | ￥1,480起(qǐ) | 10-26 天 |
| 基因需要從頭合成(chéng)** | 基因合成(chéng)費 + 加工從相費 | 14-28天 |
| 靶向(xiàng)突變 | ￥1,100/位點 | 7-9 天 |
對(duì)于克隆上面(miàn)未列出的其他類型片段，例如高GC片段，喝拿簡單重複或分段重複序列，可能(néng)需要額外的費用和周期。
*對(duì)于7kb<ORF<10kb的，需要額外增加￥1,到了000 費用和 10 天的周期。對(duì)于ORF需那拿要添加promoter、tag或者在其兩(liǎng)端添加酶切位點的，能懂額外費用請咨詢。
**對(duì)于<10kb的ORF，合成(chéng煙木)費用將(jiāng)根據合成月日(chéng)的長(cháng)度定價在￥1/bp-月照￥1.5/bp之間。對(duì)于你錯>10kb的ORF，基因從頭合成(chéng)的價格與周期請咨詢。上子
我們默認的質粒載體交付方式是E. co懂媽li甘油菌。對(duì)于不同的需求，我們可以體作提供不同規格的質粒DNA提取服務：小提（>10 ug），中提（&g討站t;100 ug），大提（>30的地0 ug），超大提（>1 mg），以熱子及特大提（>10 mg）。就木對(duì)于病毒載體，病毒包裝以不同規格的知站下遊服務方式提供。
我們的載體經(jīng)過(guò)嚴格的質量控制步驟以保證了還序列與設計方案一緻。常用的質量控制方式有DNA純化、A260/2少拍80測定、酶切鑒定、Sange志校r測序、從甘油菌中提取質粒并重新轉化等。
如果客戶選擇自行提供載體構建的相關材料，我們子窗將(jiāng)對(duì)其提供的載體骨架進(jìn)他老行限制性内切酶酶切鑒定，并對(duì)關鍵區小船域進(jìn)行測序驗證。該類載體屬于非标準載體，載體價格因情況而定。
如果需要提供骨架或模闆，請按照“外來物品接收指南1.0”將(jiāng)相應材料郵寄給我們。
甘油菌使用說(shuō)明
載體家構建的質粒載體一般以甘油菌形式交付。關于甘油菌的使用可參考以下視頻站醫内容：
使用說(shuō)明書
雲舟生物可使用多種(zhǒng)策略進(jìn)行月子載體克隆。在我們的高度優化的克隆平台上，一般的表達載體我們使用Gateway制跳克隆和Gibson組裝等方式構花會建，而shRNA和gRNA載體則使用們器基于直接連接的方式構建，價格低且周期短男愛。此外，根據具體項目的需要，我們也可以使用從頭基因合成(chéng)光微、Golden Gate等方式構建載體。
雲舟生物構建的質粒載體的宿主菌通常爲VB UltraStable™，一種(zh嗎遠ǒng)轉化效率高（>1x109 cfu/ug）并可用于擴增不穩定重複書鄉序列的菌株。因此，我們也高度推薦您使報銀用我們的VB UltraStable™化學(xué)感受态細胞以用于您的湖快載體擴增實驗。我們也提供其它宿主菌，如DH5笑費α和Stbl3，可滿足多樣(yàng)的實驗需頻林要。
質粒上的複制起(qǐ)點屬于低拷貝型
質粒的拷貝數是由質粒上的複制起(qǐ司錢)點決定的，有的複制起(qǐ)始點屬于低拷貝型。請确廠門認質粒上複制起(qǐ)點類型。對(duì)于舊務低拷貝質粒，則需要擴大細菌培養量以獲得足夠的質粒DNA。
用于質粒提取的菌量過(guò)少
請檢查确認質粒制備柱的結合容量以及您的質海慢粒是高拷貝還(hái)是低拷貝質粒。對(duì)于小量提個他取，我們建議您收集1-5 ml過(guò)夜相生培養菌液。對(duì)于大量提取，如章煙果質粒是高拷貝，我們推薦使用100-150 ml過(guò)夜培養菌液；如果是可媽低拷貝，我們推薦使用300-500 ml過(guò)夜樹體培養菌液。一般情況下，對(duì)于高拷貝質樂空粒，1 ml的過(guò)夜培養菌液可以小量提取約5 ug訊電的質粒DNA，150 ml的過(guò)夜培養菌液可以提取約50地文0 ug的質粒DNA；對(duì)于低拷貝質粒（如pET），機腦1 ml過(guò)夜培養菌液可以小量提取1.5-2.5 u電匠g質粒DNA，150 ml過(guò)夜培養菌液可以提取150-20爸這0 ug質粒DNA。
隻有小部分菌體含有質粒
有的抗生素，尤其是氨苄青黴素，在液體培養中會(huì)快速降解，導緻麗月不含質粒的細菌可以大量繁殖，最終使得質粒制備産量低。爲了避免這(z業兵hè)種(zhǒng)情況，請在使用前新鮮外南制備含氨苄青黴素的生長(cháng)培養基，并報哥确保提供足夠的濃度。另外，在培養具有氨苄抗性車輛的細菌時(shí)，請不要讓菌液飽和培養時(s道看hí)間過(guò)長(cháng)。因爲随著(zhe)培件房養時(shí)間的增加，培養基的抗生素會(huì)越來越少，許多細菌細胞也著化已死亡且它們所含的質粒DNA會(huì)被(bèi)降得輛解，所以從過(guò)飽和培養的菌液中拿謝提取的質粒DNA産量會(huì)低。請從新鮮菌液提取質粒DN腦家A，如果不能(néng)立即進(jìn)行質粒制備，妹很則可以將(jiāng)菌體離心沉澱，并儲存于-80&d地頻eg;C冰箱中備用。
直接取甘油菌進(jìn)行接菌培養
直接將(jiāng)接收到的甘油菌或穿刺菌進(jìn森答)行接種(zhǒng)，可能(néng)會(huì)偶爾出現刀新質粒制備産量低的情況。我們建議先在含有适當抗生素的LB平闆上劃算他線，然後(hòu)挑取單菌落接種(zhǒng)到含有相應抗生素的新鮮液體培師能養基中。具體操作說(shuō)明請在章弟菜單欄“資源中心>說(shuō)明書/MSDS&生鄉gt;甘油菌”進(jìn)行查看。
沒(méi)有正确使用質粒提取試劑盒
請在使用前仔細閱讀質粒制備試劑盒公她使用說(shuō)明書，防止不當操作。
質粒制備柱質量較差
某些品牌的質粒DNA制備柱質量較差店熱，請及時(shí)檢測更換相應試劑盒。
服務商工作站 >>
