水疱性口炎病毒(Vesicular st放飛omatitis virus,VSV)載體在研究病毒顆粒讀的入侵宿主細胞、辨認介導病毒感染細胞的細胞表面(miàn)受體、篩選抑制病毒藥物生很以及疫苗開(kāi)發(fā)方面(miàn)有著(暗頻zhe)廣泛的應用。VSV病毒載明到體可以高效地利用非同源的病毒蛋白進(jìn)行假型化森山(presudotyped),例如要求使用高生物安全等級的病毒包膜蛋白話喝,因此VSV也是研究高風險病毒細胞侵入機制的理想選擇。 雲舟生物開(kā鐘暗i)發(fā)了一系列先進(jìn)的那吃技術和試劑,大爲改進(jìn)了重組VSV包裝的滴度雨新、純度、可靠性和穩定性,特别是結合了我們的地鐵VSV載體克隆系統。
訂購信息
生産規格 | 應用 | 滴度 | 體積 | 價格 | 周期 |
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VSV-G蛋白VSV病毒 |
VSV中量制備 | 細胞培養 | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ¥7,780 | 21-35天 |
VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ¥9,780 |
超純化VSV中量制備 | 細胞培養和體内應用 | >108 PFU/ml | 500 ul (5x100 ul) | ¥11,880 |
超純化VSV大量制備 | 1 ml (10x100 ul) | ¥18,880 |
SARS-CoV-2 S蛋白及其變厭理體的假VSV病毒(轉基因爲Luc或EGFP) |
VSV中量制備 | 細胞培養 | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ¥15,380 | 21-35天 |
VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ¥19,580 |
SARS-CoV-2 S蛋白及其變體的假VSV病毒(其它類型轉基玩著因) |
VSV中量制備 | 細胞培養 | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ¥15,380 | 21-35天 |
VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ¥19,580 |
服務詳情
雲舟生物開(kāi)發(fā)了兩(li民熱ǎng)種(zhǒng)載體骨架用于克隆VSV基因組。兩(liǎng老黑)個骨架均包含有活性的VSV基因組成(chéng)分,子樂但是不含有G糖蛋白。第一個載體包含VSV-M林這和VSV-L基因,可以被(bèi)用于克隆您的目的基因(圖1a)。第二個載體在麗吃VSV-N基因上遊增加了一個報告基因(圖1b)。如果您還(hái)需要歌坐其它版本的載體,請聯系我們。
圖1 VSV載體骨架,包含VSV N-P-M-L基因
病毒類型
- VSV-G膜蛋白覆蓋的VSV病毒
- 使用其他膜蛋白進(jìn)行假病毒化的VSV病毒(如使用冠狀病毒刺突蛋購呢白)
- 無膜蛋白的表面(miàn)光秃的VSV病毒(可窗司用于陰性對(duì)照)
交付内容
| 非純化VSV制備服務 | 純化VSV制備服務 |
交付内容 | 定制病毒,按照規格交付: - 中量制備:>107PFU/ml,10x100 ul
- ⼤量制備:>108PFU/ml,10x100 ul
| 定制病毒,按照規格交付: - 中量制備:>108PFU/ml,5x100 ul
- ⼤量制備:>108PFU/ml,10x100 ul
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對(duì)照病毒,按照定制病毒的規格對(能村duì)應贈送: - 中量制備:>107PFU/ml,2x100 ul
- ⼤量制備:>108PFU/ml,2x100 ul
| 對(duì)照病毒,按照定制病毒的規格對(duì務錢)應選購: - 中量制備:>108PFU/ml,5x100 ul,動樹 ¥3,800
- ⼤量制備:>108PFU/ml,10x100 ul, ¥6,100
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病毒重懸液 | HBSS緩沖液 | HBSS緩沖液 |
運輸/存儲 | 幹冰/-80°C,避免反複凍融 | 幹冰/-80°C,避免反複凍融 |
推薦應用 | 體外培養細胞轉導 | 體外培養細胞轉導、動物體内細胞轉導 |
對(duì)照病毒
爲了更好(hǎo)地開(kāi)展您的實理厭驗,我們按照“對(duì)照病毒與定制病毒的生物學(xué)應用相匹配”的原則錯做給您贈送或者推薦對(duì)照病毒。例如,如果定制病毒表達一個基因,則推薦市唱的對(duì)照病毒表達熒光蛋白EGFP。如果定制病樂她毒表達打靶某個基因的shRNA,則對(duì)照病毒表達一個Scramble 舊跳shRNA。推薦的對(duì)照病飛男毒信息如下表所示:
對(duì)照病毒 | 對(duì)照載體名稱 | 對(duì)照載體ID | 定制病毒 |
EGFP對(duì)照VSV病毒 | pVSV[Exp]-EGFP | VB010000-9315gcp | 哺乳動物基因表達VSV病毒 |
運輸/儲存
我們的VSV病毒存儲在HBSS緩沖液中,并如文采用幹冰運輸。收到VSV病毒後化從(hòu),請立即放置于-80℃,長(c冷哥háng)期貯存至少6個月。VS煙動V病毒的保質期約爲一年。請避免反複凍融,因爲這(z分工hè)會(huì)導緻慢病毒滴度大幅下降。
生産/質控
圖2展示了VSV的包裝流程。VSV包裝使用VSV-ΔG轉移質山業粒,該質粒不表達G糖蛋白,但是攜帶藍費有目的基因,包裝時(shí)連同五吃河個輔助質粒共同轉染包裝細胞。五個輔助質粒分别表達VS林光V N、P、G、L蛋白,以及T7 RNA聚合酶。包裝質粒表報內達的病毒蛋白對(duì)于含有目的基因的病毒顆粒組裝是必須的。對(duì們友)比傳統利用輔助病毒的包裝方法,該流程可有效減少病毒包裝鄉理周期,增加病毒純度(無輔助病毒)。制備覆蓋有G糖蛋白的VS這器V後(hòu),收集細胞上清,再次感染包裝細胞。此時(shí)若睡購同時(shí)轉染一個表達異源包膜蛋白的質粒,器拿則可以獲得假型化的VSV病毒。到放對(duì)于超純化的VSV病毒(體内應用山紙級别),使用蔗糖密度梯度離心法討姐濃縮純化。我們使用噬斑法檢測滴度。
圖2 典型的VSV病毒包裝流程
對(duì)于我們生産的每一個重組VSV病毒,質量控制包括滴度檢測、無菌測試、朋姐支原體檢測等。如果VSV病毒載體表達熒光蛋白,則我們會(huì)進(j鄉長ìn)行熒光轉導測試。如果VSV病毒載體含有藥篩标記,我們也會(做錯huì)在轉導測試後(hòu)伴随進(jìn)行藥篩測試。此外,舞公對(duì)于超純化VSV,我們會(huì)進(jìn)行内毒素檢子樹測。
試驗驗證
我們開(kāi)發(fā)了一系列技術用以志工優化我們的VSV包裝流程。經(jīng)優化後(hòu務朋)我們的病毒展現出對(duì)比已公開(kāi)的方案具備更高唱水的轉導效率(圖3)。
圖3 VSV-G糖蛋白覆蓋的VSV轉導BHK-21多現細胞。轉導前與轉導後(hòu)24小時(shí)分别場章拍攝。倍數:100x。左:白光。右:GFP。
此外,我們針對(duì)新冠S蛋白(及其D614G突變體)V可工SV假病毒進(jìn)行大量的試驗驗證。結果表明新冠S蛋白(及其D614G用話突變體)VSV假病毒可以有效轉導高表達hACE2的BHK-21錢了細胞,但較難轉導低水平表達hACE2的BHK-姐志21細胞(圖4)。因此我們推薦使用我們的ACE2表達細身畫胞株進(jìn)行新冠S蛋白假病毒或VSV-從身G假病毒的轉導實驗。
圖4 新冠S蛋白假病毒VSV轉導BHK-21和B了和HK-21-ACE2細胞
視頻
暫無
文檔
暫無
COA
常見問題解答
我們使用噬斑試驗測定VSV病毒滴度。簡單來說畫問(shuō),即是對(duì)單層的易感細胞進(j紅窗ìn)行病毒轉導,并在培養皿中覆蓋一層瓊脂以限制病毒的訊樹擴散。每個被(bèi)感染的細胞都(章金dōu)將(jiāng)裂解并進(坐但jìn)一步造成(chéng)其周邊接觸的細胞被(bèi)感染,最終在相花培養皿上形成(chéng)一個噬斑。每個噬斑來源于一個體站VSV病毒顆粒,因此可以通過(guò)計算噬斑的畫但數量來換算出VSV滴度。
載體家生産的重組VSV病毒是複西習制缺陷型的,删除了包膜上的G糖蛋白表達基因。我們文道制備的VSV假病毒使用異源病毒的包市數膜蛋白,包括一些來源于需要被(bèi)高度報吧隔離的病毒類型。重組VSV不能(néng)進(j票現ìn)行額外的複制,在BSL2等級的實驗物秒室中也能(néng)操作。因此我們的吧生産的重組VSV特别适合用于在普通實驗室研究高風險性病毒的由其包膜蛋白介導的細站通胞感染機制。
交付周期是指訂單接收到發(fā)貨之間到做的時(shí)間,不包括需要客戶提供任何物料(妹用如病毒載體)的等待時(shí)間。
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