點突變細胞穩轉株

雲舟生物的點突變細胞穩轉株可針對(duì)細胞基因組靶序相書列創造點突變。我們的點突變細胞采用快煙CRISPR相關技術制備，需要雨兒針對(duì)轉導細胞的靶序列導入一個音業特異性的gRNA/Cas9 RN校跳P複合物，以及一個可通過(guò)HDR修複方式引入突變序列模闆的供體載體快個。我們擁有一系列獨特的技術，可讓我們在很短的周期内實現具有高HDR率厭音的高效基因遞送，高成(chéng)功率獲得敲入純合子。

亮點：

超高點突變效率：使用我們設計的供體載體和基因遞送方式，靶細胞的HDR率可達到50%。
非病毒基因遞送方式：基于電轉法的RNP實現高效基因遞送且脫靶率低。
周期短：載體設計完成(chéng)後(hòu民文)的純合子突變細胞從改造到交付快至18周。

服務詳情

Workflow for gene overexpression stable cell line engineering

圖1 點突變細胞穩轉株的構建流程。

訂購信息

服務	交付内容	價格(CNY)	周期
點突變細胞穩轉株構建	一個純合子單克隆細胞株（>10⁶個細胞/管, 2管）	￥42,980起(qǐ)	14-20周

* 增加交付單克隆數將(jiāng)收取額外費用。

QC試驗

試驗項目	方法
點突變驗證（默認）	PCR、Sanger測序
表達測試（額外收費）	RT-qPCR、WB、IF、FAC紅快S
脫靶效應分析（額外收費）	NGS、PCR、Sanger測序
染色體分析（額外收費）	核型分析
無菌測試（默認）	PCR檢測支原體、生物負荷檢測等

下遊服務

對(duì)于您的細胞穩轉株，我們可以開(kāi)展多種(zhǒng)類型的數話表型分析和功能(néng)驗證，保括細胞增殖、凋亡、遷移、熱頻細胞活力、細胞毒性等。

案例分析

圖2 使用我們的點突變方法在不同類型細視女胞中測試突變率。

Validation of point mutations in THP-1 cells

圖3 在THP-1細胞中驗證點突變效果。（A）Sange道訊r測序檢測GOI序列中的點突變。紅色方框的位置是非同義突變你化，綠色方框的位置是同義突變。（冷如B）對(duì)突變細胞（PM）和野生型細胞（購新WT）的靶位點PCR，PCR産物顯示其長(cháng)房制度相同，表明點突變沒(méi)有引發(fā)序列結構性變異。

常見問題解答

ssODN和dsDNA，哪一種(zhǒng)方式更适合用于引入點突變？▼

對(duì)于小片段插入（<10 kb），ssODN著慢通常是最佳的選擇，具有操作簡易，不回随機插入等優大舊點。然而，ssDDN的模闆大小隻能(né如中ng)小于200 bp，對(duì)于大片段插入，可以使用dsD算和NA作爲供體序列模闆。無論采用哪一種(zh樂農ǒng)方法，切割位點到突變位點的距離不超過(guò)至10 習費bp（對(duì)于ssODN）或者1 kb（對(duì)于dsDNA供體）熱微時(shí)，可以保證較高的整合效率。

爲什麼(me)需要引入同義突變？▼

盡管同義突變的氨基酸序列不變，但是會(huì)影哥物響密碼子偏好(hǎo)性、mRNA結構、穩定性以及翻譯效率。在細胞株中引入同謝熱義突變有助于研究這(zhè)些轉錄後道頻(hòu)階段可能(néng)産生的變化。此外，引入同義突變還(h熱房ái)可以擾亂CRISPR組分的靶序列（即PAM序列以及其鄰近序列），抑木文制脫靶效應造成(chéng)和舊CRISPR-Cas9編輯位點造成(chén舞他g)的非目标切割。