進(jìn)一步了解 >> 我們的質量體系通過(guò)ISO 9001通著認證。這(zhè)些産品是在我們先進(jìn)的設施中嚴格控制下低要生成(chéng)的。

突變文庫構建

雲舟生物在構建定制突變文庫的方面(miàn)答做具有豐富的專業知識。這(zhè)些文庫對(duì)于許多研究至關重要，因爲它海低們是研究蛋白質關鍵殘基和結構域的起(qǐ)始步動算驟。我們可采取靈活的通用策略爲您創建多樣(yàng)化的突變池，包括芯吃玩片合成(chéng)、易錯PCR、簡并密碼子運用和D司文NA洗牌。這(zhè)些突變可以限制在單個區域或分布在序場有列中的多個區域。

亮點

  • 多種(zhǒng)克隆策略： 我們根據您的研究目的采用各種(zhǒng)組合方法構建突變庫。
  • 高多樣(yàng)性： 我們能(néng)夠生成(chéng科很)複雜度超過(guò)108的突變文庫。
  • 覆蓋率、均一性高： 我們的突變文庫通常可實現對(duì)靶突變>9北土8%覆蓋率。
服務詳情
landing page workflow
價格與周期
服務簡述價格（CNY）周期
文庫設計我們經(jīng)驗豐富的文庫應用科學(xué)家可書個爲您采用多策略的方式設計突變文庫。您可以亮道從我們提供的選項中選擇不同的文庫載體骨架。免費1-4 天
文庫質粒制備（包括oligo合成(chéng)和NGS車視驗證）通過(guò)大規模平行載體克隆將東司(jiāng)DNA變異體插入呢影目的載體骨架，然後(hòu)進空視(jìn)行Sanger測序和NGS測序等QC步驟。默認交付形式是包含文庫質粒爸呢的大腸杆菌甘油菌。￥ 16,100起(qǐ)5-8 周
文庫的病毒包裝點擊此處了解更多病毒包裝服務信息。文庫質粒的病毒病毒包裝價格是常規單質粒載體包裝地我的1.5倍。
功能(néng)篩選樣(yàng)品的NGS測服對序分析包括細胞樣(yàng)品基因組的NGS文庫制備、llumina測序（&算大gt;500x覆蓋率）和數據分析。￥ 2,240起(qǐ)/樣(yàng)本3-5 周
技術詳情
突變文庫的構建策略
Mutation library construction strategies

芯片合成(chéng)寡核苷酸

芯片合成(chéng)寡核苷酸的方式非常适合用于生成(chén生線g)的具有各種(zhǒng)大小著商和序列的突變體，比如可在給定位點制造飽和突變。我們基于芯片的 D長銀NA 合成(chéng)長(cháng)度通常可哥和達300 nt，且錯誤率較低。

易錯PCR

易錯PCR是最直接用于開(kāi)發(fā)高度多樣(yà年煙ng)化的突變文庫的選擇，這(zhè)其中包括從修改标準PCR照友方法到突變AAV衣殼基因等多種(zhǒng)方式。更具紅這體而言，易錯PCR結合了多種(zhǒng)次優化的PC秒近R條件，如使用低保真性聚合酶、更長(cháng)的延伸時(shí)間、醫高更高的Mg2+濃度、添加Mn2+，以及使用不相等的多種(zhǒng)dNTP濃度東車等方式來對(duì)AAV衣殼基因引入随廠高機突變。

簡并密碼子

密碼子簡并機制允許一個氨基酸由多個密碼子編碼。通過(guò)向(xiàng)由舞去寡核苷酸合成(chéng)中的關都簡并密碼子引入了受控的、高度随機的突變，可對(duì)可能(néng)産生陽司視性突變的區域和氨基酸進(jìn)行針房外對(duì)性的靶向(xiàng)。例如，廣泛使用的簡并姐城密碼子突變文庫——NNK文庫，其NNK簡并引很路物涵蓋了32種(zhǒng)密碼子組合（N= A/了麗C/G/T，K= G/T），可以編碼所有2這道0種(zhǒng)氨基酸和一個終止密刀樂碼子。在文庫構建中利用簡并密碼子是一種(zhǒng)引金文入多樣(yàng)性的有效方法。

簡并密碼子類型密碼子組合數量終止密碼子數量氨基酸
NNN643All 20
NNK / NNS321All 20
NDT120RNDCGHILFSYV
DBK180ARCGILMFSTWV
NRT80RNDCGHSY

DNA洗牌

DNA洗牌是一種(zhǒng)通過(g美大uò)同源重組産生嵌合DNA序列的高效方法。這(zhè)項技術首先將(j文去iāng)親本基因切割成(chéng)随機片段，然後(hòu)員船使用無引物的PCR技術并根據部分序列同源性進(jìn)行重組，從而將(jiān黃兵g)它們重新組裝成(chéng)新的女間嵌合序列。另外，合成(chéng)洗牌將(j風空iāng)合理設計與定向(xiàng)進(jìn)化相結合，可用喝放于創建高複雜性文庫。在采用其他突變方習喝法（如易錯PCR）後(hòu)也可以進(jìn)行家族DN讀藍A洗牌。

實驗數據
Nucleotide composition of (NNK)11 in the plasmid library

圖1 質粒文庫(NNK)11的核苷酸構成(chéng)

該文庫采用NNK簡并密碼子策略構建。每根柱子代表DNA序列中不同的核苷她用酸位置，顔色表示觀察到的核苷酸類型。所有位置都(dōu)弟媽顯示出預期的核苷酸，且觀察到的頻率接近理論值（N =厭事 25% A + 25% T +25% G + 25% C，K = 50% T會機 + 50% G）。

Distribution of amino acids in a 7-mer variable region of a plasmid library

圖2 質粒文庫7-mer可變區的氨基酸分布

該文庫利用NNK簡并密碼子策略構建而成(chéng)。每根柱子分别代表理論（校藍綠）/實際（紅）上的特異氨基酸/終止密碼子的百分比。觀察到的20種(笑務zhǒng)氨基酸和終止密碼子的實際頻率與理論頻率非常接近。

mutationComplexity, coverage, and alignment rate of chip-based oligo libraries constructed by VectorBuilder.

圖3 雲舟生物芯片合成(chéng)的寡核苷酸文庫訊跳。圖示爲複雜度、覆蓋率和序列比對(duì)的一緻性房金。

數據以無偏向(xiàng)的方式收集明中于雲舟生物使用芯片合成(chéng)寡核苷酸文庫算厭。（A）這(zhè)些定制文庫的大小分布高度多樣(yàn喝船g)化，複雜度從102到超過(guò)105不等。（B）覆蓋率和讀取的比對(du妹這ì)率均很高接近100%，突出表明了我們下議文庫的極高準确性和低錯誤率。

文檔
暫無
常見問題解答