點突變細胞穩轉株

雲舟生物的點突變細胞穩轉株可針對(duì)細胞基因組靶序列創造點突變。我們民跳的點突變細胞采用CRISPR相關技術制備，需要針對(du民車ì)轉導細胞的靶序列導入一個特家答異性的gRNA/Cas9 RNP複合物，以及一個票得可通過(guò)HDR修複方式得靜引入突變序列模闆的供體載體。我們擁有她煙一系列獨特的技術，可讓我們在很短的周期内實現具湖玩有高HDR率的高效基因遞送，高成(chéng)功率獲能上得敲入純合子。

亮點：

超高點突變效率：使用我們設計的供體載體和基因遞送方式，靶細胞的HD師現R率可達到50%。
非病毒基因遞送方式：基于電轉法的RNP實現高效基因遞送且脫靶率低。
周期短：載體設計完成(chéng)後(hòu)的純合子突變細胞從改造到交付快至1快件8周。

服務詳情

Workflow for gene overexpression stable cell line engineering

圖1 點突變細胞穩轉株的構建流程。

訂購信息

服務	交付内容	價格(CNY)	周期
點突變細胞穩轉株構建	一個純合子單克隆細胞株（>10⁶個細胞/管, 2管）	￥42,980起(qǐ)	14-20周

* 增加交付單克隆數將(jiāng)道事收取額外費用。

QC試驗

試驗項目	方法
點突變驗證（默認）	PCR、Sanger測序
表達測試（額外收費）	RT-qPCR、WB、IF、FACS
脫靶效應分析（額外收費）	NGS、PCR、Sanger測序
染色體分析（額外收費）	核型分析
無菌測試（默認）	PCR檢測支原體、生物負荷檢測制腦等

下遊服務

對(duì)于您的細胞穩轉株，我她子們可以開(kāi)展多種(zhǒng)類型的表型分析和功畫兒能(néng)驗證，保括細胞增殖、凋亡、遷國弟移、細胞活力、細胞毒性等。

案例分析

圖2 使用我們的點突變方法在不同類型細胞中測志畫試突變率。

Validation of point mutations in THP-1 cells

圖3 在THP-1細胞中驗證點突變效果。（A）Sanger測序檢光資測GOI序列中的點突變。紅色方框的位置是非同義突變，綠色方框的位置是同義很兒突變。（B）對(duì)突變細胞（PM）和野生型細胞（WT）的靶位點PCR，物生PCR産物顯示其長(cháng)度相同，表明師信點突變沒(méi)有引發(fā)序列結構性變異。

常見問題解答

ssODN和dsDNA，哪一種暗年(zhǒng)方式更适合用于引入了樹點突變？▼

對(duì)于小片段插入（<視笑;10 kb），ssODN通常是最佳的選擇，具有操作簡易，不回随讀年機插入等優點。然而，ssDDN的模闆小務大小隻能(néng)小于200 bp，對(duì)于大片段離開插入，可以使用dsDNA作爲供體序列模闆。無論采用哪湖開一種(zhǒng)方法，切割位點到突變位點的距離不超司呢過(guò)至10 bp（對(d體術uì)于ssODN）或者1 kb（對(duì)于dsDN大冷A供體）時(shí)，可以保證較高的整合效率。

爲什麼(me)需要引入同義突變？▼

盡管同義突變的氨基酸序列不變，但是會(huì)影響密碼子偏黑不好(hǎo)性、mRNA結構、穩定性畫女以及翻譯效率。在細胞株中引入同義突變有助機家于研究這(zhè)些轉錄後(hòu)階段可能(néng)産生的資吧變化。此外，引入同義突變還(hái)可以擾亂CRIS友行PR組分的靶序列（即PAM序列以個來及其鄰近序列），抑制脫靶效應造成(chéng)和舊CRISPR-Cas9要司編輯位點造成(chéng)的非目标切割。