BAC修飾

通過(guò)BAC修飾（BAC mod信務ification/recombineering），我們可以將(師都jiāng)報告基因放置在BAC特歌術定的調控序列之後(hòu)，也可以將(jiāng)點突變引日綠入目的基因、或是將(jiāng你海)BAC上的片段轉移到質粒載體上以及在BAC骨架上添加篩選标記等愛南。

以下是可供選擇的服務類型，按照操作步驟定義的價格和周期請點擊了解更多>>

備注:

如何獲取BAC修飾服務？

您隻需點擊主頁上的“發(fā)送設計咨詢”按鈕，就(jiù)可以在線提交您的BAC修飾服務需求。您可以高月這(zhè)樣(yàng)描述您的需求：“我想在這(zhè)個基因的啓照讀動子之後(hòu)放置一個lacZ報告基因”。我們經(jīng)驗豐富的技術人哥和員將(jiāng)免費爲您設計一個可行的方案，并向(xiàng鐘見)您發(fā)送包含方案、報價和周期等相關信息的鏈接。如果您對(d城冷uì)該方案滿意，可直接將(jiāng)自銀其添加到購物車中，并根據說(shuō)草遠明下單。

服務說(shuō)明

免費設計BAC修飾方案

VectorBuilder經(jīng)驗豐富的技術志術團隊將(jiāng)根據您的需求，免費文讀爲您設計一個詳盡而高效的BAC修飾用醫方案。

爲您購買BAC

如果您知道(dào)您需要的BAC的ID号，請提供給我們，我有快們將(jiāng)爲您購買。如果對(duì)使用的BAC有疑惑，我們也可以根據費兵您研究的基因爲您找到合适的BAC。絕大多數BAC可從CHORI 的不議BACPAC資源中心獲取，但某些BAC需要從其他供應商購買。您也可以直接給我們吃長寄送含有BAC的大腸杆菌。

“一步法BAC修飾”

既可用于引入大片段如在某個基因的啓動子後(坐山hòu)面(miàn)加上用于示蹤的報告基因（圖1），也可引入有技小改變，如點突變（圖2）。

大片段的引入（圖1）：片段包含有目的基因（GOI）（例如LacZ或GF謝生P報告基因）、兩(liǎng)明個側爲FRT位點的藥物篩選表達框，其兩(liǎng)端具有到嗎與重組區域同源的同源臂。通過(guò)同源重組來替代BAC上的内源區域，藥慢船物篩選表達盒可用于鑒定成(chéng)功修飾的B筆又AC克隆，可通過(guò)Flp介導的重組删除該表也時達盒，隻留下一個FRT位點。

圖1. “一步法BAC修飾”示意圖：上都在啓動子後(hòu)面(miàn)引入目的基因（GOI）(如LacZ或GF明報P報告基因)

引入點突變（圖2）：片段包含突變區域、兩(liǎng)側爲FRT位點的藥物做短篩選表達框，其兩(liǎng)端具有與重組區域同源的同源臂。通過票鐘(guò)同源重組取代BAC上的内問高源區域，最後(hòu)通過(guò)Flp介導的重組删除該表達盒，隻留下一物廠個FRT位點。FRT位點被(bèi)認爲是“新森瘢痕”序列，因爲修飾後(hòu)老長的BAC除了所需的點突變之外，還(hái)攜帶這(一家zhè)個殘留的FRT。爲了不影響基因功能(要來néng)，該瘢痕序列要放置在基因的非功能她用(néng)區域，如内含子或UTR區。

圖2. “一步法BAC修飾”示意圖：在基因的第一外顯子中引入點突變并將(ji筆外āng)FRT序列放置在下遊内含子中

“兩(liǎng)步法BAC修飾鄉的”

“兩(liǎng)步法BAC修飾房內”用于將(jiāng)微小的變化（如點突變）引入BAC費影，而不留下FRT瘢痕序列（圖3）。該方新行法适用于以下情況，即在預期突變位點的附著費近，沒(méi)有合适的空間放置殘留的FRT瘢痕序列。例如，如果要說文修飾的基因是非常大的單外顯子基因，并且所需的突變位點位于基因的中間，則在友讀點突變附近沒(méi)有合适的位置來放置瘢痕序列。在這(zh樂懂è)種(zhǒng)情況下，應該使用兩(年業liǎng)步法，該方法利用表達藥物篩選标記的基因片段進(jìn)行陽性和藍睡陰性篩選（圖3）。第一步，使用該基因片段進(jìn)行同源重組來替代内金師源靶區域，通過(guò)藥物陽性篩選獲得成(chéng)功重組的BAC；第又她二步，通過(guò)同源重組，使用包含突變位點的片段替代藥物篩選基因片段作關，利用陰性選擇篩出實現點突變的BAC。

圖3. “兩(liǎng)步法BAC修飾”示意圖：在大的單個外顯子基因中引睡輛入點突變而不留下瘢痕序列

將(jiāng)篩選标記添加到BAC骨架上

使用該類BAC轉染到細胞時(shí)，BAC骨架上這我的篩選标記將(jiāng)有利于其在細胞中被關空(bèi)篩選或示蹤，這(zhè)將(jiāng)有利于通過(g區國uò)藥物篩選分離含有穩定整合BAC的細樂跳胞。

將(jiāng)BAC上的片段轉移到質粒載體上

我們可以將(jiāng)BAC的任何區域（可達6樹樂0 kb）轉移到質粒載體上單獨進(jìn高視)行研究。例如，如果利用整個BAC構建轉基因小鼠以研究在風通BAC上某個基因的功能(néng)，同一BAC上的其他基因可能(néng)會民道(huì)對(duì)研究結果有影響，而將(南文jiāng)目的基因單獨分離到質粒上并使們照用該質粒構建轉基因小鼠可以避免這(zhè)個問題。另得分外，在技術層面(miàn)，使用質粒比使用BAC更道可加簡單。

BAC修飾的鑒定

BAC修飾區域將(jiāng)通過西空(guò)測序鑒定。由于重複序列的存在，BAC可能(néng)會民自(huì)發(fā)生片段缺失。爲了降笑如低這(zhè)種(zhǒng)可能(nén她友g)性，我們將(jiāng)重新轉化修飾後(hòu)的BAC，并挑選歌器獲得單克隆，通過(guò)在整個BAC上進(jìn)行多個位工體點的PCR擴增來确認其沒(méi)有發(fā)生大片段缺失。

價格和周期

該服務的最終交付形式是含有經(jīng)修飾西學和驗證的BAC的大腸杆菌。由于該服務涉及的工作量大，所以計妹成(chéng)本相對(duì)較高，但外包給我們比自己做更實惠。由于高自方案複雜和易出錯的性質，大多數人親自做可能(néng)需要花費長(cháng朋北)達一年的時(shí)間，可能(néng)需要經雜我(jīng)過(guò)不斷的試劑采購、學(笑麗xué)習和查找問題才能(néng)成(chéng)那畫功。爲了讓您更好(hǎo)地分配和月愛節省時(shí)間，請把繁瑣的工作交給我們。

BAC修飾服務的價格和周期見下表：