雲舟生物可爲您構建具有極小的背景表達且高水平誘導目的基因表達的Te樹章t誘導基因表達細胞穩轉株。此外，我們可以設計表達Tet調控蛋白（如在他 rtTA、tTS/rtTA、tet3G 等）的細胞穩轉株文還。用攜帶TRE啓動子驅動的GOI的病毒/質粒轉導/轉染這(zhè放亮)些細胞，可以靈活進(jìn)行實驗設計并可靠地 實現Tet話農誘導基因表達。對(duì)于Tet-離知On細胞穩轉株，其目的基因的誘導表達效果通光經(jīng)過(guò)RT-qPCR 進(jìn)行驗證。每批細暗窗胞産品放行前，我們還(hái)友睡會(huì)開(kāi)展一系列QC試驗，比如無菌測試、支工些原體檢測等。
亮點：
圖1 Tet誘導基因表達細胞穩轉株的構建流程。
| 服務 | 交付内容 | 價格(CNY) | 周期 |
|---|---|---|---|
| Tet誘導基因表達細胞穩轉株構建 | 多克隆細胞群（>106個細胞/管，2管） | ￥18,980起(qǐ) | 9-15周 |
| 單克隆細胞株（>106個細胞/管，每個克隆各2管） | ￥23,980起(qǐ) | 9-15周 |
* 增加交付單克隆數將(jiāng)收取額外費用。
| 試驗項目 | 方法 |
| Tet誘導基因表達驗證（默認）資物 | RT-qPCR |
| 表達測試（額外收費） | WB、IF、FACS |
| 無菌測試（默認） | PCR檢測支原體、生物負荷檢測等 |
圖2 在293T細胞中使用Tet系統誘導表達EGFP。黃個TRE啓動子驅動表達EGFP的慢病毒轉導穩定表達tTS/rtT黑得A的293T細胞，MOI=1。針對(duì)有添加四環素（Dox+）和不答吃添加四環素（Dox-）的EGFP表達效果進(jìn)行檢測裡區：（A）熒光顯微鏡觀察。（B）流式細胞術檢測。（C）轉導後海船(hòu)24 h和48 h進(jìn)行west短學ern blot。MFI：熒光強度中值。
四環素（Tet）誘導基因表達系統是控制哺乳動物細胞基因表達的有力工媽章具。我們的Tet-On載體系統在沒(méi)有大地四環素的情況下可實現GOI幾乎完全沉默，而在添加四環素時(shí紅動)GOI快速且高水平表達。該系統包山機含多個組分， 其中tTS蛋白在無四環素的情況下主動沉中工默GOI，rtTA蛋白在四環素存在的情況下強烈激跳書活GOI表達。在沒(méi)有四環素的情況下中鄉，TetR（Tet阻遏蛋白）和K員票RAB-AB（Kid-1蛋白的計水轉錄阻遏結構域）融合産生的tTS蛋白與TRE啓動子結合，主動如不抑制基因轉錄。另一方面(miàn)，rtTA 蛋白是一種(們們zhǒng) rTetR（一種(zhǒng)突變型 Tet 阻遏蛋白）和 VP兵我16（單純疱疹病毒蛋白16的轉錄激活子結構域）的融合蛋白，如白僅在四環素存在的情況下與 TRE 啓動子結合以激活基因轉錄。我們的Tet-Of習線f載體系統在四環素存在的情況下可通過(guò)tTA蛋白與TRE啓男鐘動子的結合來抑制靶基因表達。
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